文档介绍：YUNNAN NORMAL UNIVERSITY
本科学生综合性实验报告
学号：—姓名：—
学院：生命科学学院专业、班级：班
实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞
悬浮及体细胞胚胎发生培养实验
教师：
成分
规定
用量
/mg・
L-1
浓
缩
倍
数
称取量
/mg
母液定容
体积/ml
配 1L MS
培养基吸
取取量
/ml
大
重
元
素
kno3
1900
20
38000
1000
50
nh4no3
1650
33000
CaCl2^2H2O
440
8800
MgSO4^7H2O
370
7400
KH2PO4
170
3400
配制的步骤为:确定母液的浓度和体积f计算各种化合物用量f称量f分别溶解 f混合f定容f装瓶f贴标签…放入冰箱保存。
CaCl2・2H2O最后加入。
（2）微量元素母液的配制
母
液
种
类
成分
规定
用量
/mg・
L-1
浓
缩
倍
数
称取量
/mg
母液定容
体积/ml
配 1L MS
培养基吸
取量/ml
微
MnSO4 ・H2O
3380
ZnSO4 • 7H2O
1720
量
兀
素
H3BO3
200
1240
1000
5
KI
166
Na2MoO4 • 2H2O
50
CuSO4 • 5H2O
5
CoCl2 • 6H2O
5
配制步骤同大量兀素(混合时不要求先后顺序)。
(3)有机成分母液的配制
母液种类
成分
规定用量
/mg* mL-1
称取量
/mg
母液定容
体积/ml
有机成分
甘氨酸
200
100
VB1
100
VB6
100
烟酸
100
肌醇
10
1000
配制的步骤为:确定母液的浓度和体积f计算各种化合物用量f称量f溶解f定容f装瓶f贴标签…放入冰箱保存。
(4)铁盐母液的配制
母液种类
成分
规定
用量
/mg・
L-1
浓
缩
倍
数
称取量 /mg
母液定容
体积/ml
配 1L MS
培养基吸
取量/ml
铁
盐
Na2EDTA ・ 2H2O
200
3730
500
5
FeSO4 • 7H2O
2780
铁盐母液宜单独配制，其配制步骤为：
确定母液的浓度和体积f计算各种化合物用量f称量f分别溶解f混合f煮沸数分钟f调节pH值至f定容f装瓶(棕色)f贴标签…放入冰箱保存。
(5)植物生长调节物质母液的配制
母液
种类
成分
称取量
(mg )
母液定容体积
(ml )
母液浓度
(mg/ml)
生长素
2,4-D
100
100
NAA
细胞分裂素
6-BA
KT
配制步骤与有机成分母液的配制步骤基本相同，但是2,4-D/NAA用少量95%酒精溶解，再加水定容；6-BA/KT应先溶于少量1 mol - L-1的HCl中，再加水定容。
固体培养基配制
培养基配方：
MS 基本培养基+ 6-BA l +KT l+NAA l + 2,4-Dimg/L+琼脂％+蔗糖 3% +
CHi00mg/L PH=
大量兀素:25 ml；
4WL
微量兀素：
ml；
铁盐：
ml；
肌醇：5ml；
VB1：
VB6：；
盐酸:.
;
甘氨酸:.
；
BA：
KT：；
NAA：；
2,4-D：
CH： 50mg；蔗糖:15g；琼脂：。
每组配500mL,50mL三角瓶分装20瓶，25mL/瓶。
方法步骤：
（1）培养基各种物质的混合
琼脂的溶解+350mLH2O
称取所需蔗糖量加入到琼脂溶液中溶解（15g）
按母液顺序和规定量依次量取母液并放入烧杯，并把混合母液加入到琼脂和糖的溶液内。
（2）定容：500mL
（3）调整 PH： 6
（4）培养基分装（20瓶，25mL/瓶）
（5）培养基封口
（6）培养基灭菌
（7）培养基保存备用
胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养）
。
（1）、实验材料的准备
、材料的修整、刷洗、冲洗。
、用小刀刮去胡萝卜外表皮，横切取高约1cm的圆柱形胡萝卜块3块。
（2）、准备工作
、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。
、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。