文档介绍：实验胰蛋白酶活力测定
―、原理
福林一酚试剂中的磷钨酸和磷钥酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钥蓝。
蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与实验胰蛋白酶活力测定
―、原理
福林一酚试剂中的磷钨酸和磷钥酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钥蓝。
蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林一酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。
二、实验仪器
试管
7220分光光度计
恒温水浴锅
三、实验试剂
福林试剂B :见福林（Folin）-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分（冰箱中）：，稀释并定容至 1000ml
10%三***乙酸溶液
0. 2mol/L 磷酸缓冲液（）:
%酪素溶液：，，再加少量0. 2mol/L磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml，冷藏在（冰箱）里。
500ug/L酪氨酸溶液
胰蛋白酶溶液（冰箱中）
四、实验步骤
标准曲线的制作：按下表加入试剂：
管号
1
2
3
4
5
6
500ug/LB氨酸溶液
0

蒸馏水

0
%酪素2ml，于37对水浴中反应15分钟，然后加入10% 三***乙酸3ml，过滤除去沉淀取清液1ml， , 再加入福林试剂1ml，于37 °C水浴中显色15分钟，测OD680。
以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。
样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂
管号
1
2
备注
%酪素溶液

37水浴中酶解15分钟
0. 2mol/L磷酸缓冲液

0
2mg/ml胰酶溶液
0

10%三***乙酸溶液

过滤
上清液
1
1
37水浴中显色15分钟

福林试剂B
1
1
OD680
0
五、结果计算
酶活力：在37对下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。
样品中含酶活力单位=A/15 XF
A一样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数
F一酶液稀释倍数
原始数据：（注：7号为待测液）
液体编
度计值
0
1
2
3
4
5
7
0

0

0

分光光
度计值
分光光
度计值
分光光
值度光光分
0 -
组数酪氨酸浓度为：组数/30 mg/L
*系列