文档介绍：琼脂糖凝胶电泳检测dna
【四】仪器、材料与试剂
质粒样品、酶切样品和PCR样品。
凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成像系统)等。
琼脂糖、 1XTBE电泳缓冲液、溴化乙锭、 6X载样缓冲液 （ 6X loading buf琼脂糖凝胶电泳检测dna
【四】仪器、材料与试剂
质粒样品、酶切样品和PCR样品。
凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成像系统)等。
琼脂糖、 1XTBE电泳缓冲液、溴化乙锭、 6X载样缓冲液 （ 6X loading buffer）和DNA分子量标准（ Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker ）等。
凝胶电泳系统
DYY-6C型  双稳定时电泳仪电源（北京六一） 输出范围（显示分辨率）：6-600V(1V)      4-400mA (1mA)      240W
美电泳槽Mini-Sub Cell GT Cell
凝胶成像分析系统
Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker（Ferments）
一个已知分子质量的DNA样品做最对照，用来确定待测样品的相对分子质量。
常用电泳缓冲液
缓冲液
缓冲容量
迁移速度
分辨率
用途
TAE
最低
最快
(高10％)
高分子量高
高度复杂DNA混合物；超螺旋DNA
TBE
很高
较慢
低分子量高
价格昂贵，不常用
TPE
电泳指示剂溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色，一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成上样缓冲液。
作用：
①增加样品比重，以确保DNA均匀沉入加样孔内。
②形成肉眼可见的指示带，预测核酸电泳的速度和位置。
③使样品呈色，使加样操作更方便。
上样缓冲液
溴化乙锭
溴化乙锭（ 3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶溴盐Ethidium Bromide，EB），EB染色（EB可很好地掺入到双链DNA中），在紫外光下会发出橙红色的荧光，用于对DNA进行染色和观察。
用于观察的紫外光有３种波长，一般使用中波紫外光（３０２ｎｍ）。
短波紫外光（２５４ｎｍ）观察效果较好，但对DNA的破环很大。
长波紫外光（３６６ｎｍ）：回收。
EB染料优点：染色操作简便，快速，室温下15-20min；不会使核酸断裂；灵敏度高，10ng或更少的DNA即可检出；可以加到样品中或胶中。
EB是诱变剂，使用时一定要戴手套。 EB废液要经过处理才能丢弃。
SYBR:新型低毒，高灵敏度染料，加入样品中，价格较昂贵。
【五】实验步骤
制备琼脂糖凝胶（1%）
制备凝胶板
加样
电泳
染色
结果观察
（1）制备凝胶和胶板：
45ml(1×TBE)+（ 三角瓶 ）， 煮胶，溶解，冷却至60℃(不烫手)，倒板(4-6mm)，室温下充分凝固，竖直拔下梳子 。
胶板设计（44人）：
每18孔胶板（5人X3样品+1marker），8胶板
每8孔胶板（2人X3样品+ 1marker ），2胶板
（2 ）加样：
5μl质粒DNA+1μl loading buffer ，混匀
15μlPCR产物+3μl loading buffer，混匀
10μl酶切产物+2μl loading buffer，混匀
6μlDNAMark （每板胶加一孔）
（3 ）电泳：电压3-5V/cm，约80-90V，注意电极方向
（4 ）染色：EB染色约15min
（5 ）观察：紫外透射分析仪下观察。
S
THANK
Praesent sodales odio sit amet odio tristi Praesent sodales odio sit amet odio tristi
简约
清新