文档介绍：精选实验一-薄层层析板的制备
实验一 薄层层析板的制备
实验目的
制备薄层层析板，使叶绿素在层析板上别离显色。
实验原理
薄层层析，常用 TLC〔Chromatography〕表示，又称薄层色流动相之间不同的分配比例，到达别离目的的技术。层析对生物大分子如蛋白质和核酸等复杂的有机物的混合物的别离分析有极高的分辨力
在把微细分散的固体或是附着于固体外表的液体作为固定相，把液体〔与上述液体不相混合的〕或气体作为移动相的系统中，使试料混合物中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动，利用各成分对固定相亲和力不同所引起的移动速度差，将它们彼此别离开的定性与定量分析方法，称为层析，亦称色谱法。根据移动相种类的不同，分为液体层析、气体层析二种。用作固定相的有矽胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等，或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体，也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析〔column chromatogra-phy〕，在玻璃板上涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析〔thin-layer chromatography〕，后者可与用滤纸作为固定相的纸上层析进行同样的分析，即在固定相的一端，点上微量试料，在密闭容器中，使移动相〔液体〕从此端渗入，移动接近另一端。通过这种展开操作，各成分呈斑点状移动到各自的位置上，再根据Rf值的测定进行鉴定。当斑点不易为肉眼观察时，可利用适当的显色剂，或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。也可采用在第一种移动相展开后再用另一移动相进行展开〔这时的展开方向应与原方向垂直〕，使各成分别离完全的双相层析〔two-dimensional chromatography〕。别离后，将斑点位置的固定相切取下来，把其中含有来自试料的物质提取进行定量分析。但为制备与定量，柱层析那么更为适宜。在柱层析中，移动相从参加试料的一端展开到达另一端后，继续展开使各成分和移动相一起向柱外分别溶出，这就是广泛使用的所谓洗提层析〔elution chromatography〕。层析根据固定相与
溶质〔试料〕间亲和力的差异分为吸附型、分配型、离子交换型〔离子交换层析〕等三种类型。但这并不是很严格的，有时常见到其中间类型。此外，近来也应用亲和层析，即将与基质类似的化合物〔通常为共价键〕结合到固定相上，再利用其特异的亲和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。
按层析的机理划分：
吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。
吸附层析：利用吸附剂外表对不同组分吸附性能的差异，到达别离鉴定的目的。
分配层析：利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，使之别离。
离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。
凝胶层析：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。
◆按流动相与固定相的不同划分：
气相层析、液相层析。这两大类层析是以流动相不同来划分的。如同时区分流动相和固定相，划分为：气固层析、气液层析、液固层析和液液层析等。
◆按操作形式划分：
柱层析、纸层析、薄层层析、高效液相层析等。
柱层析：将固定相