文档介绍：质粒提取原理
采用碱裂解法抽提质粒DNA是基于染色体DNA 与质粒DNA的变性与复性的差异不同而达到分离目 的的。在PH大于12的碱性条件下，染色体DNA的 氢键断裂，双螺旋结构解开，DNA变性。质粒DNA 的大部分氢键也断裂，但超螺旋共质粒提取原理
采用碱裂解法抽提质粒DNA是基于染色体DNA 与质粒DNA的变性与复性的差异不同而达到分离目 的的。在PH大于12的碱性条件下，染色体DNA的 氢键断裂，双螺旋结构解开，DNA变性。质粒DNA 的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状结构的 两条互补链不会完全分离， 缓冲液调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复 到原来的构型，留在溶液中。而染色体DNA不能复性 而形成缠连的网状结构。通过离心，染色体DNA、不 稳定的大分子RNA及蛋白质-SDS复合物等一起沉淀 下来而被除去。
Solution I：葡萄糖可增加溶液的年度，维持渗透 压，防止染色体DNA受机械剪切作用而被降解，污染 质粒DNA；溶菌酶（可省略）水解菌体细胞壁的化学 成分肽聚糖中的81,4糖苷键，具有溶菌的作用。当 pH<，溶菌酶受到抑制；EDTA有两个作用：（1） 螯合Mg2+等金属离子，抑制DNase对DNA的降解。 （2） EDTA的存在有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的 反应要求有较低的离子强度环境；Tris-HCl作为缓冲 溶液维持适当的浓度和pH值。
Solution II： NaOH，DNA 在 <pH< 时时稳定 的，但当pH>12或pH<3时，就会引起双链之间氢键 的解离而使DNA变性。加Solution II后系统的pH高 ，线性染色体DNA和环型质粒DNA氢键均发 生断裂，双链解开而变性，但质粒DNA由于其闭合环 型结构，氢键只发生部分断裂，且其两条链不会发生 完全分离，待pH调至中性闭合环型质粒DNA很快复 性恢复原来的构型，而染色体DNA不能复性。SDS 是阴离子表面活性剂，它有溶解膜蛋白破坏细胞膜， 解聚细胞中核蛋白，能与蛋白质结合成为 R-O-SO3-. R+-蛋白质复合物，使蛋白质变性而沉淀下 来。但SDS能抑制RNase的作用，所以在以后提取中 必须将其除干净。
Solution III： KAc-HAc 缓冲体系 pH 约为 ，一 方面要将整个溶液体系调至中性，使变性质粒DNA能 够复性并稳定存在；另一方面加入高浓度盐会导致 SDS一蛋白质复合物，变性大分子染色体DNA、RNA 等凝聚沉淀，因为SDS （十二烷基硫酸钠）遇K+后变成 PDS （十二烷基硫酸钾），PDS是不溶于水的。SDS喜 欢和蛋白质结合成为SDS一蛋白复合物，而遇K+后形 成PDS一蛋白复合物便凝聚沉淀下来，同时长长的染 色体DNA部分和部分RNA也被PDS共沉淀下来。
酚-***仿：都是非极性分子，而水是极性分子，当 蛋白水溶液与酚-***仿混合时，蛋白质分子间的水分子 被酚-***仿挤出去，使蛋白失去水合状态而变性。变性 蛋白质的密度比水的密度大，经过离心，与水相分离， 沉淀在水相下面，而酚-***仿比重更大，保留在最下层。 作为表面变性剂的酚-***仿，在除去蛋白质的作用中， 也有一些缺点：（1）酚与水有一定程度的互溶，酚相中 水的溶解可达大约10%〜15%，溶解在这部分水相