文档介绍：蛋白质浓度的测定
一．试验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝 G250 的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色, 其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G蛋白质浓度的测定
一．试验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝 G250 的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色, 其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感性。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。
二．试验设备与试剂设备：普通离心机， 721 型分光光度计试剂：标准蛋白液（100ug/ml）
三．实验材料
新鲜绿豆芽
四．实验内容
1. 标准曲线的制备
取9支干净的试管，按表进行编号并加入试剂。
\管试\ 剂\
1 （空白）
2
3
4
5
6
7
8
9
标准蛋白液/ml
0

%nacl/ml

0
考马斯亮蓝染液/ml

蛋白质含量/（ug/ml）
0
10
20
30
40
50
60
80
100
2. 样品蛋白的测定
（ 1 ）样品蛋白液制备
准确称取 2g 新鲜绿豆芽胚轴的部分，研磨成匀浆，离心分离
（4000r/min,10min）。取上清液用 %nacl 定容到 10ml。
（ 2）含量测定
另取两只干净的试管，，, 混匀。室温静置3min，与波长595nm处比色，读取吸光度。
五．实验结果
1. 标准曲线
结果如表所示，并以吸光度为纵坐标，个标准液含量为横坐标做标准曲线。
试管号
1
2
3
4
5
6
7