文档介绍：UV-7504C紫外可见分光光度计
刘冰
2010-9-30
紫外可见分光光度法原理
UV-7504C紫外可见分光光度计
测定方法
紫外可见分光光度法 (ultraviolet spectrophotometry）
UV-7504C紫外可见分光光度计
刘冰
2010-9-30
紫外可见分光光度法原理
UV-7504C紫外可见分光光度计
测定方法
紫外可见分光光度法 (ultraviolet spectrophotometry）
利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
紫外可见分光光度法的特点
1 与其它光谱分析方法相比，设备和操作简单，费用少，分析速度快
2 灵敏度较高
3  干扰物少
4 用途广泛
朗伯-比尔定律
是紫外可见分光光度法的理论基础。
当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
A= κ cl
比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
紫外可见分光光度法原理
UV-7504C紫外可见分光光度计
测定方法
主要部件的性能与作用
基本结构:
光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统
↑
样品
吸收池
吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其中以1cm光径吸收池最为常用。
200~400nm：紫外光区；
400~760nm：可见光区；
>760nm：红外光区。
UV-7504C紫外可见分光光度计参数
光谱带宽：4nm
波长范围：200~1000nm
波长精度：±2nm
稳定性： ±
紫外可见分光光度法原理
UV-7504C紫外可见分光光度计
测定方法
测定方法
1）接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热30分钟。 2）根据所需波长选择测定波长。 3） 将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。 4）盖上暗箱盖，按下归零键，。 5） 逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。 6） 比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。
入射光波长的选择
通常是根据被测组分的吸收光谱，选择最强吸收带的最大吸收波长为入射波长。当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低，峰形稍平坦的次强峰或肩峰进行测定。
监测细菌的生长情况,可以通过测OD600来监测 。该波长是针对浊度，而分光光度计在600nm处对浊度的反应比较灵敏。
OD600还有别的用途，比如浓度测定、酶活测定等。
注意事项
一般供试品溶液的吸收度读数，～。郎伯-比尔定律只适用于稀溶液,太大了，A-C曲线已经偏离了直线性，越大弯曲越严重，需要稀释样品。
拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。
清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。如比色皿被有机物沾污，可用盐酸-乙醇混合洗涤液（1∶2）浸泡片刻，再用水冲洗。不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗比色皿，以免损坏。也不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。
每次做完实验时，应立即洗净比色皿。比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。
仪器的光栅、反射镜绝对不能擦拭，否则将损坏仪器光学表面，增加杂散光。
谢谢！