文档介绍：第五章 吸 光 光 度 法
§ 吸光光度法的基本原理
§ 光度分析的方法和仪器
§ 吸光光度法的灵敏度与准确度
§ 显色反应与分析条件的选择
§ 吸光光度法的应用
Date
1
Analitical
b
dx
I
I-dI
s
Date
12
Analitical Chemistry
、透射比T与浓度c的关系
A
T
c
A=kbc
Date
13
Analitical Chemistry
3. K:吸光系数 (Absorptivity)
当c的单位用g·L-1表示时，用a表示，
A＝abc a的单位: L·g-1·cm-1
当c的单位用mol·L-1表示时，用表示。
－摩尔吸光系数(Molar Absorptivity)
A＝ bc 的单位: L·mol-1·cm-1
反映用吸光光度法测定某物质的灵敏度
Date
14
Analitical Chemistry
-比尔定律的适用条件
1）. 单色光
应选用max处或肩峰处测定
2）. 吸光质点形式不变
离解、络合、缔合会破坏线性关系
应控制条件(酸度、浓度、介质等)
3）. 稀溶液
浓度增大，分子之间作用增强
Date
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Analitical Chemistry
0 1 2 3 4 mg/ml
A
。 。 。 。
*
0
溶液浓度的测定
A＝ bc
工作曲线法
(校准曲线)
-比尔定律的分析应用
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Analitical Chemistry
6. 吸光度的加和性与吸光度的测量
A = A1 + A2 + … +An
用参比溶液调T=100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。
Date
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Analitical Chemistry
§ 光度分析的方法和仪器
方便
灵敏
准确度差
观察方向
： 是用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。 比较的是透过光的强度
c1
c2
c3
c4
一、光度分析的几种方法
Date
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Analitical Chemistry
：是借助分光光度计来测量一系列标准溶液的吸光度，绘制标准曲线，然后根据被测试样的吸光度，从标准曲线上求得被测物质的浓度含量。 比较的是有色溶液对某一波长光的吸收情况
Date
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Analitical Chemistry
二、分光光度计
光源
单色器
吸收池
检测系统
稳压电源
分光光度计的基本部件
通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光。
波长可调, 故选择性好, 准确度高。
Date
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Analitical Chemistry
三、 分光光度计的类型
Date
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Analitical Chemistry
§ 吸光光度法的灵敏度与准确度
一. 灵敏度的表示方法:摩尔吸光系数 ()
=A/bc (L·mol-1·cm-1)
越大, 灵敏度越高:
104～5×104 为中等灵敏度;
>105为高灵敏度; <104为低灵敏度.
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Analitical Chemistry
例1 邻二氮菲光度法测铁 已知(Fe)=, b=2cm , A= 计算
解： c(Fe)= mg/L=×10-3/
=×10-5mol/L
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Analitical Chemistry
1. 朗伯—比耳定律的偏离
标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。引起偏离的因素（两大类）：
（1）物理性因素
（2）化学性因素
二、准确度
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(1) 物理性因素
难以获得真正的纯单色光。
分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。
(2) 化学性因素
朗伯-比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；假定只有在稀溶液c<10-2mol/L 时才基本符