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植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果
肇 庆 学 院
生命科学学院 生物化学 课实验报告 实验老师 李 公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果
肇 庆 学 院
生命科学学院 生物化学 课实验报告 实验老师 李芸瑛
12级 生物科学3班5组 姓名：张鹏 学号：36实验日期：2013年11月27日
实验题目 植物中脯氨酸含量的测定
实验目的：
了解植物体内脯氨酸含量对植物抗寒性的影响，掌握标准曲线法测定蛋白质质量浓度的基本操作和722型分光光度计的试用和操作方法。
实验原理：
采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态(干或鲜样)限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三***反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。 样品在520nm波长下比色，即可从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。
实验材料：
木瓜叶叶片
实验器材：
1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8. 胶头滴管；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。
实验试剂：
***溶液：将茚三***溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L磷酸中，搅拌加热 （70℃）溶解，贮于冰箱中。
2. 3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
。
。
实验步骤：
（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。
（2）系列脯氨酸浓度的配制 取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液，，，，及，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ml。
（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三***溶液，每管在沸水浴中加热30min。
（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
（5）用胶头滴管轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。
（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）
根据吸光度测定，所得数据如下：
编号
1
2
3
4
5
6
脯氨酸浓度（μg/2ml）
2
4
6
8
10
12
吸光度
2.