文档介绍：基因工程的基本操作程序ppt
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
连续
不连续
编码区
非编码
基因工程的基本操作程序
基因工程的基本操作程序
1、目的基因的获取调控元件，如增强子等；
（5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。
2、基因表达载体的组成：
目的基因+启动子+终止子+标记基因
它们各自的作用是什么?
启动子：位于基因的首端的一段特殊的DN***断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质
终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DN***断，能终止mRNA的转录
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来
（1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。
（2）用___________切断目
的基因，使其产生_____
____________。
（3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组
DNA分子（重组质粒）
限制酶
黏性末端
同一种限制酶
的黏性末端
切口
DNA连接酶
相同
:
1、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是
A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码子
B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用
C．标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选
D．基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别
A
2、目前转基因工程可以
A. 打破地理隔离但不能突破生殖隔离
B. 打破生殖隔离但不能突破地理隔离
C. 完全突破地理隔离和生殖隔离
D. 部分突破地理隔离和生殖隔离
C
(三)将目的基因导入受体细胞
常用的受体细胞：
动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、酵母菌等。
将目的基因导入受体细胞的原理：
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
转化——
目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程
受体细胞
稳定
表达
*
*
方法
导入植物细胞
导入动物细胞
导入微生物细胞
农杆菌转化法
基因枪法
花粉管通道法
——显微注射法
—— 感受态细胞吸收DNA分子
(三)将目的基因导入受体细胞
*
1、将目的基因导入植物细胞
（1）农杆菌转化法
特点:
能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力
Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上
转化过程:
Ti质粒
目的基因
构建
表达载体
导入
植物细胞
插入
植物细胞染色DNA
表达
新性状
转入
农杆菌
（2）基因枪法
基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。
（3）花粉通道法
植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。
2、将目的基因导入动物细胞
①方法：显微注射法
②程序：
目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物
3、将目的基因导入微生物细胞
常用法：Ca2+处理
常用菌：大肠杆菌
微生物作受体细胞原因：
繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少
过程：
Ca2+处理大肠杆菌
感受态细胞
表达载体与感受态细胞混合
感受态细胞吸收DNA
1、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是
A．结构简单、操作方便 B．繁殖速度快
C．遗传物质含量少、简单 D．性状稳定、变异少
2、基因工程常用的受体细胞有
①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞
A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．①②④
B
D
3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是
C
4. 采用基因工