文档介绍：: .
不能作为碳源。
氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如 N 、NH 、NO 、蛋白质、
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氨基酸等。只有固氮微生物才能利用 N 。
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（3）培养基配制的原则:目的要明确、pH 值要适宜、营养要协调和要经济节约。
该实验步骤
：在两个 250mL 的三角瓶中分别装入 50mL LB 液体培养
基和 50mL LB 固体培养基(刚配好,尚未凝固),加上封口膜。将培养皿用牛皮纸
包好,放入灭菌锅 内,1kg 压力灭菌 15min。如使用高压锅 灭菌,则有压力后开始
计时灭菌 15min。
：灭菌后，待高压锅或灭菌锅压力 与大气压相同时（即没有压力了）
打开锅 盖。将有培养基的三角瓶和培养皿放到超净台上,打开超净台的紫外
灯和过滤风(注意:打开紫外灯后人必须离开),待固体培养基冷却到60℃时(手
放上还有些热的时候),关闭紫外灯,点燃酒精灯,用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面,
并用酒精棉球擦手。在酒精灯火焰旁,以右手无名指及小指夹持含有固体培养基
的三角瓶的封口膜,右手其他 3 个手指拿着三角瓶;左手拿着培养皿并打开上
盖的一边,将三角瓶中的培养基(10~12mL)倒在培养皿里。将培养基分别倒至4
个培养皿中，每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平位置上,并轻轻晃动,
使培养基铺满底部,待凝固后即形成平面。
：将大肠杆菌斜面和有液体培养基的三角瓶放在左
手中,靠近酒精灯火焰；右手拿着接种环,并用右手无名指和小指夹住斜面的棉
塞和三角瓶封口膜。将接种环在火焰上烧红再深入到斜面。接种前,应先使接种
环接触培养基以达到冷却的目的,然后再取菌体。将菌体放入三角瓶的液体培养
基中,将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。三角瓶在37℃,每分钟 200 转的摇
床上振荡培养 12h。
。在酒精灯火焰上灼烧接种环，在摇床上培养了12h 的菌液(由
教师代做)打开,接种环部分深入到菌液中。然后,在固体培养基的平板上连续划
线,接种环只在菌液中蘸菌液一次,划线后盖好培养皿
。最后,将培养皿倒置(盖在下面),在 37℃恒温培养箱中培养 12~24h 后,可看到
在划线的末端出现不连续的单个菌落,表明菌已被分离。
：在无菌操作下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种在斜面
上,37℃培养 24h 后,置于 4℃冰箱中保存。
实验二 分离以尿素为氮源的微生物
一、实验原理 脲酶
(NH ) C=O+H O 2NH + CO
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(有脲酶)
(酚红)颜色的变化检知培养基 pH 的变化(脲酶催化的化学反应)
三、材料
100mL 烧杯中装入 50mL70%酒精,将玻璃刮刀浸泡在其中。
100mL 三角瓶中配制好 25mL 全营养 LB 固体培养基( 蛋白胨, 酵
母提取物, g NaCL 和 琼脂糖,水 25mL),加上封口膜后灭菌待用。
100mL 三角瓶中配制好 25mL 尿素固体培养基( 葡萄
糖,, HPO , 酚红和 琼脂糖,水 15mL),加上封口膜后