文档介绍：紫外－可见分光光度法
原理、应用及有关注意事项
第一节 概述
紫外－可见分光光度（UV－VIS)法是一种常用的检验方法，它是通过被测物质在紫外光区的特定波长或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
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可贴，就是在257nm、262nm、269nm三个波长处测定最大吸收，规定三个波长处都应有最大吸收，没有最大吸收就可以判定为假药）。
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肩峰或吸收谷处的吸光度测定受波长变动影响也较小，有时也可用谷值、肩峰值与峰值同时作鉴别依据。（比如甲硝唑片的第三个鉴别就是分别在277 nm和241 nm的波长处分别测最大吸收和最小吸收。）
具有不同吸光基团的化合物可有相同的最大吸收波长，但它们的摩尔吸光系数常有明显的差别，所以摩尔吸光系数常用于分子结构分析中吸光基团的鉴别。对于分子中含有相同吸光基团的物质，他们的摩尔吸光系数常很接近，但可因相对分子质量不同，使百分吸光系数的值差别较大，可以用百分吸光系数作为鉴别的依据。（比如结构相似的***睾丸***和丙酸睾丸素在无水乙醇中的最大吸收波长λmax都在240nm，但在该波长处的E1%1cm数值，前者为540，而后者为460，因而有较大的鉴别意义）。
（摩尔吸光系数的意义是在一定的波长下，溶液浓度为1mol/L厚度为1cm时的吸光度。百分吸光系数，又称比吸光系数，只在一定波长下，溶液浓度为1％（W/V）厚度为1cm时的吸光度。）
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对比吸光度比值的一致性
有时物质的吸收峰较多，可规定在几个吸收峰处吸光度或吸光系数的比值作为鉴别标准。（比如维生素B12注射液的鉴别，规定应在361nm与550nm的波长处有最大吸收；～）。
如果被测物质的吸收峰和对照品的相同，且峰处吸光度或吸光系数的比值又在规定范围之内，则可考虑被测样品与对照品分子结构基本相同。
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第二：药品的纯度检测
纯度检测又分为杂质检查和杂质限量检测。
杂质检查
若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。（例如，乙醇中可能含有苯的杂质，苯的λmax为256nm，而乙醇在此波长处几乎无吸收，％，也能从光谱中检查出来，这个应用前景很广阔。）
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若化合物在某波长处有强的吸收峰，而所含杂质在该波长处无吸收或吸收很弱，则化合物的吸光系数将降低，若杂质在该波长有比此化合物更强的吸收，将会使化合物的吸光系数增大，且会使化合物的吸收光谱变形。（举一个间接的例子吧，前一段时间快检车抽到一批吗叮啉，红外快检认定是假药，送到所里以后，我们用薄层法做了一下，发现样品也显斑点，位置基本一致，而且斑点很大，按说可以认定样品不假，慎重其间，我们就有作了一个紫外鉴别，发现它在288nm处没有最大吸收，而在240nm处有很强的吸收，紫外图谱和标准品差异明显，最后认定为假药）。
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杂质限量检测
限度
药品纯与否是相对的，要想制得一个纯品，所花费得成本很高，对于我们常用的药品来说，纯品意义不大，所以药典就规定了一个允许杂质存在的限度，就是杂质限量。紫外常用来检测杂质限量。例如肾上腺素在合成过程中有一个中间体肾上腺***，当它还原成肾上腺素时，反应不够完全而带入产品中，成为肾上腺素的杂质，影响肾上腺素的疗效。因此，肾上腺***的量必须规定在杂质限量之下。在310nm处，肾上腺***有最大吸收，而肾上腺素则几乎没有吸收，因此，测定肾上腺素盐酸溶液在310nm波长处的吸光度，可检测肾上腺***的混入量。（具体方法为将肾上腺素用（9-2000），在310nm的波长处测定，）。在比如，我们常用的VC片，由于氧化变为黄色，影响到疗效，，在440nm的波长处测定吸光度，。
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比值
有时也会用峰谷吸收度的比值控制杂质限量。例如，碘磷定有很多杂质，如顺式异构体、中间体等，在碘磷定的最大吸收波长294nm处，这些杂质无吸收，但在262nm碘磷定的吸收谷处有吸收，则可利用碘磷定的峰谷吸光度的比值作为杂质限量检查指标，已知纯品碘磷定的A294/A262＝，如果在262nm
处的吸光度增加，。因此，可以规定一个峰谷吸光度的最小允许值，作为限制杂质含量的限度。
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三：比色法
测定能吸收可见光的有色溶液的方法称为可见分光光度法，通常称为光电比色法或比色法。
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第四：含量测定
根据Beer-lambere定律，物质在一定波长处的吸收度与浓度之间是线