文档介绍：PCR 扩增及 DNA 琼脂糖凝胶电泳之迟辟智美创作
刘琳 1131428 环境科学
一、实验目的
1．学****并掌握 PCR 扩增的基来源根基理与实验技术.
2．对扩增后的 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分 析相应结果.
二、实置足量的 PCR 反应体系.
分别向 9 个薄壁管中分别加入 24 ul 的反应体系，并分别 添加 8种分歧的模版，并于第 9个薄壁管中加入无菌 ddH2O 作为阴性对比.
将薄壁管放入 PCR 扩增仪中，依照预定法式进行 PCR 30~40 ：
预变性：94°C3min
循环：94°C变性30s
55C 退火 30s
72C 延伸 30s
末次延伸： 72C 5min
PCR扩增完成后，将样品取出并保管于15°C环境中.
2. DNA 琼脂糖凝胶电泳实验
称取琼脂糖粉末，放到一锥形瓶中，加入适量的 电泳缓冲液 .然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明 .摇 匀，待冷却至60°C左右，在胶液内加入适量的EB.
取有机玻璃制胶板槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒 入已冷至60°C左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面.
待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进 电泳槽内 .
在槽内加入 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面 .取 1卩1缓冲液和5卩1待测DNA样品混合后，用移液枪滴加至凝 胶的加样孔中.
接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电
压最高不超越5V/cm,
调节电压使分带清晰.
观察溴酚兰的带（蓝色） 约 1cm 处，可停止电泳 .
灯，通过观察孔进行观察.
五、实验结果与讨论
在紫外***仪的样品台上重新铺上一张保鲜膜，赶去气 泡平铺，然后把凝胶放在上面 .关上样品室外门，翻开紫外
如图所示：从左至 右，分别是模版1-8号， 第9列为阴性对比.
前8列均有明显的条 带呈现，而阴性对比无显 示，说明扩增整体效果很 ， 上面一条线所覆盖的条带 基本可以代表扩增的发生 的片段位置，参照图可以看出扩增片段在 200bp 9 个阴性对比的第二条线处可以看到较为模糊的条带，其实 不是是呈现假阴性， 条带与最右侧的 marker 比较可知该片段呈现在 100bp 左 右，其实不是由于实验把持等问题而发生的污染.
实验的照片显示实验结果有拖尾现象，可是其实不影 响后续实验
.在实验过程中由于有些试剂加到了管壁上面， 并没有完全加入， 1 列条带 中呈现了其他的亮带，可能是由于在前期的扩增实验中滴 加试剂时由于量过少而进行的摇匀和融合等把持发生了非 特异性扩增，也有可能是因为胶板制作过程中梳子的位置 体而言，实验结果较为满意.
六、实验注意事项
由于PCR技术非常敏感，可使一个DNA分子得以扩 增，装有 PCR 试剂的离心管翻开之前，应先在微量离心机 ，要 控制好温度、时间和循环次数.
最好在加完所有其它反应成份后才加模板DN