钙离子在C型钠尿肽抑制乙酰胆碱增强胃窦环行平滑肌收缩效应中的作用.doc

文档介绍：钙离子在C型钠尿肽抑制乙酰胆碱增强胃窦环行平滑肌收缩效应中的作用
作者:邢德刚张燕梁艳玲杨红
【摘要】目的探讨细胞内外钙离子在C型钠尿肽(P)对乙酰胆碱(Ach)引起的大鼠离体胃窦环行平滑肌收缩效应中的作用。方法利用浴槽孵育离体大鼠胃窦环行肌肌条,用离体平滑肌张力记录装置记录平滑肌肌条收缩活动,观察钙离子对Ach引起的大鼠离体胃窦环行平滑肌收缩效应的影响。结果 P对Ach引起的胃平滑肌自发性收缩增强效应有明显的抑制作用,在用无钙灌流液灌流后,P仍能抑制Ach引起的收缩效应。而用胞内钙离子释放抑制剂(TMB8)后,P不能抑制Ach引起的收缩效应。结论 P抑制Ach引起的胃平滑肌自发性收缩增强效应与胞内钙释放有关。
【关键词】钙离子;C型钠尿肽;乙酰胆碱;胃窦环行平滑肌
近年研究发现,钠尿肽(NP) 3种受体NPRA、NPRB和NPRC在胃窦的黏膜和肌肉组织中都存在〔1,2〕,对胃肠吸收、分泌和肠动力等方面均有调节作用。众所周知,调节胃肠运动兴奋最主要的是胆碱能系统,那么NP在调节胃肠运动与胆碱能系统之间有怎样的关系尚未见报道。既往研究表明,C型钠尿肽(P)对胃平滑肌细胞的L型钙电流、自发瞬间外向钾电流、非选择性阳离子电流(Icch)均有一定作用〔3~5〕,h与胆碱能系统调节胃肠作用有着密切的关系,提示NP能影响胆碱能系统调节胃肠作用。笔者近期的研究发现,用胆碱能系统激动剂CarbAchol能明显增强胃平滑肌自发性收缩活动,这种兴奋作用可被P抑制,证明P与胆碱能系统在调节胃平滑肌自发性收缩活动中起相互拮抗作用,其作用机制与P改变胞内cGMP系统,h有关〔6〕。为进一步探讨P对胃肠运动的调节与胆碱能系统相互作用的机制,本实验观察细胞内外钙离子在P影响胆碱能系统效应中的作用。
1 材料与方法
实验动物
选用体重200~230 g的B8)购自Sigma公司。重碳酸盐缓冲液成分(mmol/L):NaCl 116、KCl 、NaHCO3 24、NaH2PO3 1、MgC12 1、CaC12 2、,。
制备胃窦环行肌条
实验时猛击大鼠头部致昏,迅速取出其全胃。沿胃小弯打开胃,在Krebs液中漂洗干净。以黏膜面朝上将胃固定在蜡盘中,用小剪刀轻轻去除其黏膜层。平行于胃窦环形肌纤维走向切取肌条(10 mm× mm),将其固定于恒温灌流槽内(37℃),用碳酸氢钠缓冲液连续灌流并通混合氧,利用生物信号处理系统记录胃窦平滑肌自发性收缩活动。
Ach与P相互作用的测定
用累积法描记胃窦肌条对Ach(1×10-8~1×10-3 mol/L)的量效曲线及给予P(10-7 mol/L) 10 μl再重复5HT量效曲线。
胞内钙离子与Ach、P相互作用的关系测定
肌条处于自然长度(不过度牵拉或松弛),在重碳酸盐缓冲液孵育60 min左右,出现稳定的自发性收缩;以此为对照,将重碳酸盐缓冲液更换成无钙灌流液灌流,收缩稳定后,加入Ach 10-5mol/L,此时Ach所致的收缩是依赖细胞内Ca2+的收缩,待收缩稳定10 min后,加入P 30 μmol/L。
胞外钙离子与Ach、P相互作用的关系测定
标本在正常含钙灌流液中自发性