文档介绍：SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳1
适用于教师试讲、学校演讲、教学课件、说课大赛
一、什么是SDS？
十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS)
是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体
（monomer）和分SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳1
适用于教师试讲、学校演讲、教学课件、说课大赛
一、什么是SDS？
十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS)
是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体
（monomer）和分子团（micellae）的混合形
式存在。
SDS的作用
破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。
一、SDS-PAGE的基本原理
（一）蛋白质分子的解聚样品介质和聚丙烯酰***中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。
1、SDS 阴离子去污剂变性剂助溶性试剂断裂分子内和分子间的氢键分子去折叠破坏蛋白质分子的二级和三级结构
2、强还原剂巯基乙醇（β-mercaptoethanal）二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT）使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。
SDS和还原剂的作用：（1）分子被解聚或组成它们的多肽键（2）氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束。（3）蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，消除了不同分子之间原有的电荷差异。
蛋白质-SDS胶束的特点（1）形状像一个长椭圆棒（2）短轴对不同的蛋白质亚基-SDS胶束基本上是相同的。（3）长轴的长度则与亚基分子量的大小成正比。
（三）凝胶浓度的选择由于SDS电泳分离并不取决于蛋白质的电荷密度，只取决于分子解聚后SDS-蛋白质胶束的大小，因此凝胶浓度的选择会直接影响分辨率。不同分子量范围的蛋白质应选用不同的凝胶浓度.
（四）分子量测定1、相对迁移率（Rf） Rf即用每个带的迁移距离除以溴酚蓝前沿的迁移距离得到的。测量位置应在蛋白带的中央。蛋白带迁移距离Rf= ———————— 溴酚蓝迁移距离
蛋白带迁移距离固定前的凝胶长度 Rf= ————————— X ————————— 干燥后的凝胶长度溴酚蓝迁移距离
2、作图以已知蛋白质分子量的常用对数值为纵坐标，Rf为横坐标绘图
3、通过测定未知蛋白质的Rf值，便可在标准曲线上读出他的分子量
二、去污剂的选择无离子去污剂：Lubro W；Brij35， Tween Triton阳离子去污剂：cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB） cetylpyyridinium （CPC）阴离子去污剂：SDS deoxycholate
三、方法1、分类（1）根据对样品的处理方式的不同还原SDS电泳非还原SDS电泳带有烷基化作用的还原SDS电泳
（2）根据缓冲系统和凝胶孔径的不同连续电泳不连续电泳（3）根据电泳的形式圆盘电泳垂直电泳平板电泳水平电泳
2、操作（1）制备分离胶（2）制备积层胶(堆积胶）
分离胶聚合之后
（3）加样品样品的处理在蛋白溶液中加入过量的SDS后，可引起以下的反应：蛋白质本身的电荷被屏蔽氢键断裂疏水相互作用被取消多肽被去折叠(二级结构破坏),并形成椭球形
①还原SDS处理当加入还原试剂DTT或β-二巯基乙醇后，蛋白质被完全去折叠，只根据分子量分离。
②带有烷基化作用的还原SDS处理