文档介绍：乳酸菌精简方法及显微镜使用方法
第一部分：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法。 第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检， 下面是具体的染色方法和镜检方法，请参考。
第一部分：乳酸菌革兰氏染色方法
目的
在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染乳酸菌精简方法及显微镜使用方法
第一部分：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法。 第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检， 下面是具体的染色方法和镜检方法，请参考。
第一部分：乳酸菌革兰氏染色方法
目的
在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳 酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。
原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的 复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇 乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会 出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏 阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂 后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合 物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰 氏阴性菌呈红色。
实验用品准备：
灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、 100ul-1000ul 移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微 镜、香柏油、擦镜纸、计时器
操作：
涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取 10ul 待检样品滴在载玻片的中央，
用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水
分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。
固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回
通过 2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为 宜（不超过
60°C）,放置待冷后，进行染色。
4初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约lmin。
5 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
6媒染：用lOO-lOOOul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片， 染色约 1min。
水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
脱色：斜置载玻片，滴加 95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时 20-30S，
随即水洗。
9复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约lmin。
水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目
的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色，紫色的是革兰氏 阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。
清场
实验结束后，将显微镜油镜上的残留的香柏油用擦镜纸轻轻擦去，将载物台移至最底处， 将灯光调到最暗并将其关闭电源，拔下电源插头，罩上防尘罩
第二部分