文档介绍：微生物学实验
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
目的要求
显微镜油镜使用的原理
实验材料
实验程序
思考题
目 的 要 求
学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识
使用油镜观察细菌的几种基本
1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。
2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。
实验程序Ⅲ
细菌运动性的观察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、半固体培养法，常用水浸法和悬滴法来观察细菌的运动性。 1. 水浸片法
2. 悬滴法
思 考 题
油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？
使用油镜时，为什么必须用镜头油？
镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
实验二 细菌简单染色
目的：巩固无菌操作技术，掌握细菌的涂片和单染色技术，了解口腔中的微生物及其观
察方法。
内容：1、细菌单染色操作技术
2、染色法或负染色法观察口腔中的微生物
二. 实验材料和用具
大肠杆菌(E．coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的斜面菌种。
吕氏美蓝染色液、石炭酸复红染色液、黑色素液或碳素墨水、香柏油、二甲苯、无菌水、显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签。
1、涂片 在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1—1．5Cm2(图7—1A、B)。
2、干燥 将涂片于室温中自然干燥
3、固定 手执载片一端，使涂菌的一面向上，将载片通过微火2～3次。在火上固定，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片—在火上烤，否则细菌形态毁坏(图7—1 C)。
4、染色 将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂菌处，染色约2rain(图7—1D
5、水洗 倾去染色液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止(图7—1 E)。
6、干燥 自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体(图7—1F)。
7、待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用拍
四、注意事项
载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄
实验三 细菌的革兰氏染色法
一、目的要求
学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、实验材料
：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金
黄色葡萄球菌。
：草酸铵结晶紫液、路哥氏碘
液、95%乙醇、番红液。
：显微镜、载玻片、接种环、酒
精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲
苯等。
三、基本原理
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。
1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都成负反应。
革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。
一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。
革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高，脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。
革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高，肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质，使细胞壁通透性增加，结晶紫——碘复合物易被抽出，于是被脱色。
再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。
四、方法与步骤
操作过程如下：
涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色（1min）→水洗→路哥氏碘液媒染（1min）→水洗→95%乙