文档介绍：紫外分光光度法的原理
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绿、蓝、青、紫等组成的光谱，称为发射光谱。如果在白炽灯光与棱镜之间放一个有色溶液的玻璃皿，则通过棱镜后的光谱上会出现一处或几处暗带，这种带有暗带的光谱称为该有色溶液的吸峰迁移到312nm，只要检测在312nm处是否有吸收峰，即可判断有无水杨酸。再如无水乙醇精制过程中要用苯，测定无水乙醇中是否残留苯
，测定其吸收光谱，乙醇在210 ~600nm之间无吸收峰，而苯在250、254 nm有吸收峰，以纯无水乙醇为参比，对样品进行光谱分析，如果在250、254nm处出现吸收峰，则说明有苯残留。
（纯度）:如药典规定VB12的E1%max，361nm，1cm=207，%，求实际浓度，方法：药液用重蒸水精确稀释20倍，水做参比，，其含量为：1%∶207=x%∶ ，x%=%，浓度= %×20=%
:一般的比色分析中都有标准品，未知样品都是通过和标准溶液对比分析含量。某些情况下，没有标准品，可以用摩尔吸光系数或百分吸光系数进行测定，直接测定溶液的吸光度，通过和该纯物质的吸
光系数比较，可以计算出浓度。这样的分析需要经过精确校正了波长的分光光度计，紫外分光光度计的波长一般精确到2nm，可以承担这样的分析。如果知道分子量的话，百分吸光系数和摩尔吸光系数之间可以互相换算，换算公式是：百分吸光系数=10×摩尔吸光系数÷物质的分子量。
比如血红蛋白是4个亚基组成的蛋白质，。每个亚基都在高铁***化钾[K3Fe(CN)6]和***化钾[KCN]溶液中形成单体***化高铁血红蛋白（HiCN），它的特征
（最大）吸收峰在540nm处，摩尔吸光系数是11000，表示为Emolmax,540nm,HiCN=11000。
测定样品在同样条件下的吸光度，就可以计算出含量。如：***化高铁试剂中，，求血液中Hb的含量(g/L)。第一步，计算血液稀释倍数：÷=251（倍）；第二步，计算：1mol∶11000=x mol∶，x=÷11000 mol/L，乘以分子量和稀释倍数变为g， x=÷11000×× 251=（g/L）。
如果有些物质不知分子量，用它的1%溶液在同
样条件下测定，用百分吸光系数同样可以换算。
5. 紫外吸收光谱在某种程度上反映了化合物的性质和结构，所以可以用于有机化合物的定性和结构分析。利用标准样品或标准图谱可以对未知化合物进行鉴定，即控制相同的测量条件，将未知化合物的吸收光谱与标准品或标准图谱进行对照，如果两者吸收光谱的形状、吸收峰的数目、位置、最大吸收波长及吸光强度完全一致，则可说明它们分子结构中存在相同的生色基团，初步确定它们是同一种物质，如咖啡因的定性。
由于大多数有机化合物的紫外光谱比较简单，缺乏精细的结构特征，而且很多生色团的吸收峰几乎不受分子中其它非吸收基团的影响，因此，仅根据紫外光谱鉴定有机化合物有很大局限，一般必须与红外光谱、质谱、核磁共振波谱等相配合，才能进行精确的鉴定。
6. 溶剂对紫外光谱的影响：在测定有机物的紫外可见吸收光谱时，在溶解度容许范围内，应尽量选择非极性溶剂或极性较小的溶剂（烷、烯烃，如正己烷、正庚烷），以获得吸收光谱的精细结构。与标准样品或标准图谱进行对比
时，必须用相同的溶剂。所选择的溶剂在所研究的光谱区域内应该没有明显的吸收；并且不含有其它干扰物质；与溶质没有相互作用。否则会使光谱线产生移动，低于此波长时，溶剂的吸收不可忽略。
常用溶剂的波长范围如下： .
溶剂 使用波长范围 溶剂 使用波长范围 甲醇 >210 二***甲烷 >235 . 乙醇 >215 ***仿 >245 .
水 >210 乙酸乙酯 >260 .
96%硫酸 >210 苯 >280 .
*** >215 甲苯 >285 .
（三）作为光度计使用：有色的反应液