文档介绍：实验四蛋白质的颜色反应和沉淀反应
目的:
掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
2. 原理:
蛋白质分子中的某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸不完全相同,颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
I. 蛋白质的颜色反应
取少许结晶尿素放在干燥试管中,微火加热,尿素溶化并形成双缩脲,释出的氨可用湿润红色石蕊试纸试之。至试管内有白色固体出现,停止加热,冷却。然后加10%NaOH 溶液1ml 混匀, 1%CuSO4溶液2滴,观察有无紫色出现。
另取一试管,加蛋白质溶液10滴,再加10% NaOH 溶液10滴及1%CuSO4溶液4滴,混匀,观察是否出现紫玫瑰色。
注意:硫酸铜不能多加,否则将产生蓝色的Cu(OH)2。此外在碱溶液中氨或铵盐与铜盐作用生成深蓝色的络离子Cu(NH3)42+,妨碍此颜色反应的观察。
在一试管内,加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3滴,加热,冷却后再加10%NaOH 溶液10滴,观察颜色反应。
取1mL 蛋白质溶液置于试管中,加2滴茚三酮试剂,加热至沸,即有蓝紫色出现。
注意:1) 此反应必须在pH5~7进行;
2)加热注意安全,管口禁止朝人!
II. 蛋白质的沉淀反应
1. 目的:
加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
了解蛋白质变性与沉淀的关系。
2. 原理:
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒,在一定的理化因素影响下,蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
取蛋白质溶液3 ml,加入等量饱和硫酸铵溶液(50%饱和浓度),微微摇动试管,使溶液混合静置5 min,此时析出的为球蛋白;
将上述混合液过滤,滤液中加入约一药匙硫酸铵粉末,至不再溶解,析出的即为清蛋白。再加水稀释,观察沉淀是否溶解。