文档介绍：医学免疫学实验
刘焰
实验内容
一、实验室规则
二、实验报告书写要求
三、自做实验项目:
①对流免疫电泳
②巨噬细胞吞噬功能试验
③间接免疫荧光实验
④ ELISA双抗原夹心法测HBs-Ab
⑤凋亡细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳
四、示教实验项目:
①沉淀反应(单扩、双扩、火箭电泳、免疫电泳等)
②淋巴细胞转化实验、E花环实验
实验室规则
1、穿好工作服。需要时严格进行无菌操作。禁止在实验
室吃东西、吸烟。
2、认真做好各项实验,各种实验物品按指定地点存放,
使用后的吸管、滴管及玻片等放指定地方。
3、实验中发生意外事故时,应立即报告及时处理,切勿
隐瞒或自作主张,不按规定处理。
4、爱护室内仪器设备,按使用规则操作,不得随意拨动
电器开关,显微镜用好后要功能部件复位。实验室公
用物品用完之后按原样放回,不得擅自借出或带出到
其它实验室。
5、节约使用实验材料,如不慎损坏了器材,应告知相关
管理人员登记。
6、实验完毕后整理操作区,关好水、电、门、窗。需培
养的材料要标记组名,姓名等。
实验报告书写要求
实验项目、年级、班级、实验者、同实验者、年月日等填写清楚
(一)实验名称
(二)原理
(三)材料
(四)方法
(五)结果
(六)分析讨论
(七)思考题
第一次实验
内容:
1、实验一对流免疫电泳(自做)
2、实验二巨噬细胞吞噬功能检测(自做)
3、单扩、双扩、对流、火箭、免疫电泳(示教)
4、凝集反应、沉淀反应、免疫细胞检测等(理论)
 
要求掌握:
1、抗原抗体反应特点、影响因素
2、凝集反应、间接凝集反应、沉淀反应概念
3、对流免疫电泳原理、吞噬细胞吞噬功能检测原理
第二次实验
内容:
1、实验三 ELISA双抗原夹心法测HBs-Ab (自做)
2、实验四间接免疫荧光(自做)
3、实验五凋亡细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳(自做)
4、淋巴细胞转化实验、E花环实验结果(示教)
5、免疫标记技术、免疫细胞检测等(理论)
要求掌握:
1、间接免疫荧光原理
2、ELISA (双抗原夹心法)原理
3、标记一种抗抗体可检测多种Ag-Ab的原理
4、凋亡细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳原理
实验一对流免疫电泳
[原理]
对流免疫电泳是双向琼脂扩散与电泳技术的结合。Ag或Ab分子在一定的pH溶液中带有电荷,在电场作用下可发生定向移动。将Ag、,因各种血清蛋白质都带负电荷,泳向阳极。由于电渗作用,液体则流向阴极,二者方向相反。Ab(多为丙种球蛋白)的等电点较高(pI 6~7),故带负电荷少,所以电泳力小于电渗力,向阴极移动。而Ag的等电点较低(pI 4~5),所带负电荷多,故其电泳力大于电渗力,向正极移动。如Ag、Ab相应,相遇,在比例适当时即形成白色沉淀线。由于电场限制了Ag、Ab分子的自由扩散,因而提高了试验的敏感性(提高10~20倍),并缩短了反应时间(与双向琼脂扩散相比)。
电渗
负极正极
Ag Ab
 
电泳力: 正极正极
 
电渗力: 负极负极
[材料]
1.   抗原:人血清
2.   抗体:抗人血清
3. 巴比妥缓冲液( mol/L,pH )、%
巴比妥缓冲离子琼脂、% 巴比妥缓冲离子琼脂
4. 其它:载玻片、模板、打孔器、载玻片、微量加
样器、电泳仪、电表等
[方法]
1. 制板:取一洁净载玻片,% 巴比妥琼脂铺底、烘
干,放置水平台面上。%巴比妥琼
脂,立即浇注在已铺底的玻片上,制成厚薄均匀的琼脂板。
2. 打孔:待琼脂凝固后,用打孔器按下图打孔,孔径3 mm,
孔距5 mm。
3. 加样:用微量加样器取Ag(人血清)20 μL分别加于阴极
侧1、2、3、4孔内,阳极侧5、6、7、8各孔均加抗体(抗
人血清)。加样量以孔满为宜,但不可溢出孔外。
:琼脂板放入电泳槽内,琼脂板两端用滤纸或纱布与缓冲液相接, Ag端接负极电源,抗体端接正极电源。按电场强度4~6 V/cm电泳50 min左右。
方法: