文档介绍：实验一植物中总糖的测定
3, 5-二硝基水杨酸比色法
实验目的
掌握总糖定量测定的基本原理
熟悉3, 5-二硝基水杨酸定糖法的基本操作实验原理
各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解性质不同，可将植物样品中的单实验一植物中总糖的测定
3, 5-二硝基水杨酸比色法
实验目的
掌握总糖定量测定的基本原理
熟悉3, 5-二硝基水杨酸定糖法的基本操作实验原理
各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解性质不同，可将植物样品中的单糖、双糖、多糖分别提取出来。再用水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖醛酸及其他产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色深浅成比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，通过标准曲线，便可求出样品中总糖的含量。多糖水解时，在单糖残基上加了一个分子水，因而在计算中需扣除已经加入的水量，测定所。
实验材料、仪器与试剂
.实验材料
面粉
.实验仪器
刻度试管或比色管，刻度吸管，恒温水浴锅，烧杯，容量瓶，电子天平，分光光度计，三角瓶。
.试剂
(1) 1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取500mg分析纯葡萄糖，置于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到500ml的容量瓶中。以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
a:3, 5-二硝基水杨酸试剂：, 5-二硝基水杨酸溶于少量热蒸馏水
中，溶后移入1000ml容量瓶中，加入325ml 2mol/L氢氧化钠溶液，再加入45g丙三醇，摇匀,冷却,定容至1000ml。
b:3,5-二硝基水杨酸试剂： 3, 5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L氢氧化钠溶液加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000ml，储于棕色瓶中备用。
碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。
酚猷指示剂：，溶于250ml70%乙醇中。
6mol/L盐酸溶液
6mol/L氢氧化钠溶液操作步骤
1 .葡萄糖标准曲线制作
取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
将各管摇匀，在沸水浴中加热5mi n，取出后用自来水冷却全室温，加蒸馏水定容至25ml，混匀。在540nm波长下，以0号管为对照，分别测定其它六支
管的吸光度，并绘制标准曲线
表1葡萄糖标准曲线制作
口
AvV
吕号
1mg/ml葡萄糖标准液
（ml）
蒸馏水
（ml）
DNS( ml)
葡萄糖含量
（mg）
吸光度
(OD540)
0
0
2

0
1

2

3

4