文档介绍：优选--医学查验实验指导
优选--医学查验实验指导
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优选--医学查验实验指导
《临床查验基础》
实验指导
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（供医学查验专业五年制本科使用）
遵义医学院医学查验系组编
2005 年 12 月
第一章 铁血红蛋白在波
长 540nm 处有汲取峰，可用校订的高精细分光光度计进行直接定量测定，或用
HiCN 参照液进行比色法测定， 依据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。
【器械 】 一次性消毒采血针，微量吸管，试管。 5ml 移液管，75%（V/V ）乙
醇棉球，无菌干棉球，分光光度计，试管。
【试剂 】
1．HiCN 转变液（文齐液）***化钾（KCN）50mg，高铁***化钾 [K3Fe（CN）6]200mg，
无水磷酸二氢钾 （KH2PO4）140mg，Triton X –100 ，蒸馏水加至 1000ml，
纠正 pH 至 ~。此液淡黄色透明溶液， 用蒸馏水调零， 比色杯径 ，
波长 540nm 处的吸光度应 <。储存在棕色有塞玻璃瓶中， 放 4℃冰箱保存，
一般可保存数月。如发现试剂变绿、污浊不可以使用。
2．HiCN 标准液（200g/L）商品试剂。
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【标本 】 外周血。
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【操作 】
1．直接定量测定
（1）加转变液：试管内加 5mlHiCN 转变液。
（2）采血与转变：取全血 20ul，加到盛有转变液的试管底部，用上清液频频冲
洗吸管 3 次，充分混淆，静置 5min。
（3）测定：以切合 WHO 标准的分光光度计（惯例测准时带宽应小于 6cm）。波
长 540nm 处，光径（比色杯内径） ，HiCN 转变液或蒸馏水调零，测
定吸光度（ A）。
（4）计算：依据标本的吸光度 （A）直接计算出血红蛋白浓度 （g/L）。
血红蛋白（ g/L）=A × 64458/44000× 251+A×
A： 540nm 处测定管吸光度。
64458：当前国际公认的血红蛋白均匀相对分子量。
44000：1965年国际血液学标准化委员会 （ICSH）公认的血红蛋白摩尔消
光系数。
251：稀释倍数。
2．HiCN 标准液比色法测定
（1） 标准曲线绘制和 K 值计算。用 HiCN 标准液倍比稀释后（ 50g/L、100g/L、
150g/L、200g/L），在所用的分光光度计上（相当 540nm 处）分别测定各稀释
度的吸光度， 以标准品血红蛋白含量为横坐标、 吸光度为纵坐标， 绘制标准曲
线。或求出此换算常数 K。
（2） 标本的血红蛋白转变和比色同直接测定，获取标本的吸光度（ A）。
（3） 经过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用 K 值来计算血红蛋白浓
度，即 Hb（g/L）=K× A
例，如倍比稀释后 HiCN 标准液 50g/L、100g/L、150g/L、200g/L，分
别测得 540nm 处的吸光度为 、、、，标本的吸光度为 。
先求 K 值，再计算出标本的血红蛋白浓度（ g/L）。
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K=ΣHb/ΣA=50+100+150+200/+++=
Hb=× =（g/L）
【注意事项 】
1．血红蛋白测定方法好多。但不论采纳何种方法，都一定以 HiCN 法为标准，
绘制标准曲线。 标准曲线或 K 值应按期检查， 并与分光光度计相当。
2．标准微量吸管一定经过水银称重法校订。加液一定正确，血液与转变液充分
混匀。可用血红蛋白取代抗凝血进行判定。
3．HiCN 转变液不可以储存在塑料瓶中， 不然会使 CN-丢掉，测定结果偏低。HiCN
转变液应储存在棕色他塞是玻璃瓶中， 4℃冰箱保存一般可用数月， 但不可以在
0℃以下保存，因为结冰可惹起高铁***化钾复原，使转变液退色无效。 HiCN
转变液是一种低离子强度而 pH 又近中性的溶液，碰到白细胞过多或异样球
蛋白增高的血液标本， HiCN 比色液会出现污浊。若因白细胞过多惹起的浑
浊，可离心后去上清液比色；若因球蛋白异样增高（如肝硬化者）惹起的浑
浊，可向比色液中