文档介绍：中国农业科学院硕士学位论文向:动物传剩茼令齐刎黼种履匝撞《镜幕蛐酒检测方法建立论文编号:硕士研究生:蔡绪禹师:吴东来研究员申请学位类别:农学硕士密级:指导教专业:预防兽医学研究方培养单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提交日期月
甋瓹:篜甒.::一
彬\.徽\\.撩象一、’学编衫灰令阻蛭./.例中国农业科学院硕士学位论文评阅人、
⋯名::训年月关于论文使用授权的声明时间:胱鞔踉耤≤日时间:年‘月堋C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。.
№⑽髂崧薏《摘要本研究旨在制各一种可同时检测、、鳌綱、、、本课题首先根据系锹嫉腏、、鶺’、、、虫媒病毒侵改茉谝赘械慕谥ǘ锶缥谩Ⅱ绲忍迥诮蟹敝车ú恢虏。峭过叮咬的方式将病毒传播给人畜等哺乳动物,从而引起人畜严重疾病的一类病毒。虫媒病毒包括黄病毒科、披膜病毒科、布尼亚病毒科等个病毒科的嘀植《荆渲校夜逊掷氲种,证实在我国流行的病毒有郑直鹞A餍行砸倚湍匝撞《尽⑸帜匝撞《尽⑿陆鲅H炔毒、登革病毒,其中,乙型脑炎病毒和森林脑炎病毒被国家列为法定报告传染源。近年来,随着国际化进程加快,境外虫媒病毒传入我国的可能性显著增加,因此,快速准确的检测虫媒病毒在传染病防控上有重要意义。基因芯片技术是世纪年代中期发展起来的一种多学科交叉的新技术,具有高通量、高度平行性、自动化等特点。本研究是以流行性乙型脑炎病毒森林脑炎病毒珼、狂犬病毒、东方马脑炎病毒珽、西方马脑炎病毒琖、基肯孔雅病毒、裂谷热病毒种可致人畜脑炎的人兽共患病为研究对象,其中,除外,均属于虫媒病毒范畴。、墓押塑账峄蛐酒糜诙砸陨帜匝撞《窘锌焖佟⒃缙诩觳狻1究翁獾难究将用于检测种致脑炎的人兽共患病病毒,对防止外来病原入侵,减少病毒对人类健康和畜牧业发展的危害,有着重要的社会意义和经济价值。全基因组序列和所构建的质粒、男蛄校ü鼶析软件进行多序列比对分析,选择了高度保守区域设计寡核苷酸探针,每种病毒设计条探针,共设计了条寡核苷酸检测探针,探针长度约惶秸氲腡滴:探针与其它病毒基因组的同源性不得大于%。同时应用引物设计软件,在该保守区域内,针对上述种病毒共设计了对特异引物,用于病毒靶核酸的多重┰觥将合成好的探针用%的谆欠溶解到终浓度为,经变性处理后,点制到醛基化修饰的玻片上,以制备检测芯片。提取待检病毒兴婊醋B迹蕴匾煲锞呕楹虾蠊采枇⑺母龆嘀豍扩增体系:楹、、骷;楹加琍、骷觢;组合各加,、各加;楹加豂;、骷觢8从μ逑稻,—ǘ任嘶鹞露任妫嘶鹗奔,延伸时间多重从μ逑当昙芹牡骍,后通过耦联蹦ü馊玖戏肿佑糜谛酒性咏环从Α通过对杂交条件进行优化,最终确定点样探针浓度为畉罴言咏灰号ǘ群ゼ柞胺,最佳杂交温度为,最佳杂交时间为。利用优化后的杂交条件,对基因芯片进行有效性、重复性、特异性、敏感性验证。用上述种病毒的┰霾锘旌虾蠼行酒咏唬果表明,在所有病毒探针位点均可以看到明显的检测信号,而阴性对照信号较弱或没有信号,说明该检测方法有效性良好。从三批不同时间制备的芯片中各随机抽取牛糜谘橹ば酒奈榷、.、⒌歉锊《琑、尼帕病毒和等生物分和
性与重复性,杂交结果显示,无论是同一批次之间的芯片还是不同批次之间的芯片,杂交效果理想,稳定性与重复性较好。用黄热病毒⒖谔阋卟《⒊Φ啦《⒘感病毒进行非特异性验证,结果表明,没有非特异信号产生,说明该检测方法特异性良好。通过对、畹图觳獠《玖亢妥畹图觳饪奖词懈梅椒ǖ拿舾行允匝椋果表明,对最低检测病毒量为,,以、.做为模拟