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驯怕爷物节独创性声明关于论文使用授权的声明年多月如,,年多月矽日’本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:时间:年多月劫日本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:~
∥硝如繇今眠’纱彰认韧铆∥磁牟风猝成甏中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表/论文题目转基因植物基于目焖倬芳觳夥椒ㄑ芯论文作者杨菲专业植物病理学研究方向植物一病原物分子豆作指导教师吴茂森副研究员培养单位芯克⒅行植物保护研究所姓名职称单位专’业签名研究员巾圉农业科学院校物保护研究所阅王琦教授中国农业大学农学与生物技术学院人王慧敏北京农学院橇物病理学席囤农业大学农学韩成贵中圆农业火学农学答中圆农业科学院植赵廷昌辩副研究中录厥羽芳助理研究员论文答辩时地点月日~祝:.农科院掖保所第一会议室王锡锋评主
摘要技术在转基因植物上的应用越来越广,包括已经允许商业化生产的转基因植物中,但目前对转基因植物的快速精确检测技术相对滞后。本研究的目的在于建立基于转基因植物快速精确的检测体系,实现对转基因植物的有效检测,弥补现有转基因检测技术的不足。检测体系的建立主要基于探针的制备、多重⑷ɑ蜃槔┰觥⒒蛐酒交技术及锏谋涓葱缘缬镜燃父龇矫妗关于探针的制备,首先通过查阅大量文献搜集并整理了转基因事件中常用转基因元件个,包括启动子个,终止予觯≡癖昙腔个,报告基因龊湍诤觥8上述转基因元件的保守序列设计引物,┰龌竦玫阒菩酒奶秸搿M鄙柚醚粜浴⒁跣院涂白对照用于后期:签片杂交实验的质量监控。其中阳性对照为真核生物中普遍存在的阴性对照为野猪肝脏中表达的一个基因,空白对照为不含任何核酸的点样液。探针经椒扩增获得,扩增产物纯化定量后用于点制基因芯片。本研究搜集了种参镅纷魑<觳舛韵螅种转基因水稻,制胀ㄗ;蛑物,肿?赵靥宓亩哉兆;蛩荆种野生型水稻。提取上述样品的基因组∫徊糠样品进行多重┰觯┰霾镉胄酒咏唬涣硪徊糠盅方腥ɑ蜃槔┰觯竦米愎辉交的样品并经片段化处理后与芯片杂交。本研究优化了多重逑导盎蜃槠位逑担竦昧耸视糜谛酒咏坏难贰?U沽样品,琑蚿的多重镉胄酒咏皇笛椋阂约癘基因组样品与芯片杂交实验。两种样品处理方式的杂交结果显示:多重酚胄酒咏缓蠹觳到强烈的转基因元件的信号,基因组样品与芯片杂交检测到阳性对照、水稻基因组元件及转基因元件的信号。芯片杂交实验取得成功,其结果可用于下一步实验。但结果中存在一些假阳性,因此芯片杂交实验有待进一步完善。本研究以样品@萘酱涡酒咏皇笛橹屑觳獾降钠舳雍椭罩棺由杓埔铮扩增转基因目的片段,根据结构的特点,利用变复性电泳实验进行了检测验证。结果表明,扩增得到的转基因目的片段,变复性后条带位置的确发生了变化,而转空载体的对照则没有,说明变复性电泳实验是可行的。本研究下一步将对其它样品进行检测。本研究经过对探针制备、样品准备、芯片点制、芯片杂交和变复性电泳等实验体系的摸索和优化,初步建立了依据醇觳饧ㄊ欠裎猂;蛑参锏募际跆逑担梢杂糜诙訰转基因植物进行检测,对转基因植物的规范管理具有十分重要的意义。关键词:,转基因检测,基因芯片,多重,
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录目第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..榈嫉淖B己蠡虺聊璴窒蟆的基本机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..在转基因作物中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.转基因作物中应用的潜在风险⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.;蛏锇踩侍狻.;蜃魑镏蠷那痹诜缦铡转基因植物检测技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..嘀豍技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..ɑ蜃槔┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.转基因植物常用转