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同期:≯/。年厂月;/日日期:如瓿г铝腥原创性声明学位论文使用授权声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。’根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑卅笱А1C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑ā
但由于和化疗药物的严重毒副作用,从而影响了预后,并限制了进一步提高患者生存率。因此,从基因治疗的角度,寻找毒性低、疗效好、特异性强的新的治疗技术具有重要的临床意义。扇偶际跏堑苯裱芯勘茄拾┗蛑瘟屏煊虻摹桓鋈鹊恪K且恢肿录后基因沉默现象,在以往的实验中,通过单基因扇拍芄灰种浦琢鱿胞的生长增殖。然而无论在基础研究或临床实验中,单独干扰某个基因对研究肿瘤的防治方面存在有很大局限性。利用分子生物学技术,针对不同基因发展的基因治疗技术,通过改变或修饰相关基因及其表达产物的方式治疗恶性肿瘤已成为肿瘤生物治疗中最引人注目的研究领域,也可能是恶性肿瘤治疗的希望所在。目前国内外研究同时干扰多个基因的报道较少。尤其三个以上的基因同时干扰更为少见。联合沉默肿瘤细胞中多个癌基因,会成为研究肿瘤基因治疗的一个前沿问题。也是肿瘤基因治疗中一个新的研究方向。由于肿瘤的发生发展是多基因突变多步骤多因素共同作用的结果,我们分鼻治疗多
方法析,如果同时阻断其中的几条通路,对肿瘤的治疗效果可能比只阻断一条要好,为进一步研究多基因共沉默在肿瘤治疗中的作用,我们带着这样一个全新观念需要验证的思路,通过不同检验手段付诸于实验来验证多个基因串联在一起的真核质粒能否同时沉默目的基因的表达并且能否能够最大限度地发挥基因沉默的效果。研究多基因共干扰的前提是设计出一种方法,能够同时转染干预多个基因的表达。本实验通过利用分子生物学基因克隆技术,,#,研究其能否对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用诱导细胞凋亡,能否最大限度地提高单个基因的沉默效率,为研究鼻咽癌基因治疗奠定实验基础并提供治疗策略,有望为鼻咽癌基因治疗提供一个行之有效的新思路。构建同时表达甿,,⒑ü馑乇昙堑膕质粒命名为,,分别命名为,,〤.细胞株。以激光共聚焦显微镜观察质粒在赴H炯氨泶锴榭觥以噻唑蓝法检测细胞增殖活性。.在水平上检测对目的基因表达的抑制作用。免疫印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果。窒∈。体内裸鼠成瘤:以激光共聚焦显微镜观察质粒在移植瘤癌组织中转染及表达情况并通过体积变化,和免疫印迹及凋亡检测等改变。,’●‘
结果指标观察质粒对肿瘤的抑制效果。,而质粒.,芄槐籗盖谐鲆惶踉,,坏鹊醮得髂康幕蚱蜼琒琱已经分别插入到质粒载体,,,里。挑取克隆正确的质粒转化菌液,,ゲ庑颉>测序结果分析:均为插入正确的克隆质粒,而且质量均符合设计标准。通过本实验,应用有效的克隆技术,构建出一个载体同时编码霾煌基因的表达质粒,这将为以后多基因共沉默奠定坚实的研究基础。质粒转染检测质粒转染细胞瞻锥哉兆槲醇泶锏穆躺ü庀胞。其他各组均可见大量表达绿色荧光的细胞,其中阴性对照组细胞生长良好,有许多贴壁细胞表达绿色荧光。多基因组和各单基因组出现大量悬浮的表达绿色荧光的圆形死亡细胞。其中多基因组凋亡细胞数较多。我们将质粒转染赴蠊簿劢瓜晕⒕迪鹿鄄斓酱罅勘泶锫色荧光的细胞,说明质粒能有效转染该细胞。法检测细胞活力与空白对照组比较,、、、.组各时间点的细胞吸光度稻灾陆担琍.:榉直鸷蚉.、、各组之间比较,..、转染癌细胞小时细胞生长抑制率分别达到%、%、%、%、%。峁允咀H细胞后,多基因组细胞增殖明显受抑制,说明同时沉默.,母龌虮鹊ザ莱聊渲械囊桓龌蚰芨行У囊种赴纳ぁ摘要,:.
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