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锄彬日期:妒,犀厂月咖/日期沙,/年厂月哆日\原创性声明学位论文使用授权声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。、
中文摘要允彻芰郯〦赴鹥表达的影响郑州大学第一附属医院肿瘤学中国郑州食管鳞癌是我国北方最常见的消化道恶性肿瘤之一,尤其是河南省林县发病率最高。手术治疗、化学治疗、放射治疗以及生物治疗为主的综合治疗,使食管癌治疗有了较快的发展。但是,食管鳞癌发生的确切机理仍然不清楚。因此,如何提高食管鳞癌的早期诊断率,以及抗肿瘤药物的开发仍然是个巨大的挑战。颂翘錝っ竘琾遣溉槎物雷帕霉素靶蛋紅琺的一个重要的下游靶蛋白,能够调节肿瘤细胞生长、周期进展和存活。在细胞信号通路网络中发挥着复杂的作用。当前研究的热点主要是抑制剂,现在有多种抑制剂已经进入临床试验,并取得了初步成效。抑制剂也能够改变肿瘤的放化疗敏感性。而针对淖瓒喜呗缘难芯炕购苌伲襭的活化水平与抑制剂的敏感性的关系还有待进一步研究。因此,本课题试图构建匾煨砸种频亩谭⒓蠷瑂泶镌靥澹⒓觳馄涠允彻芰圩聪赴┫赴,株细胞和磷酸化,蛋白表达的影响,而能够选择出干扰效果较好的匾煨詓表达载体,为迸一步研究谙赴诘纳物学功能提供有效地工具。方法泶镌靥骞菇根据杓圃颍贏就旧杓撇⒀∪个匾煨园序列,而设计合成正反义危’端添加鯰,作为酆厦窱的终止子,两端加酶切位点。合成的正反义寡核苷酸链经退火形成双链,
.砑捎玫ヒ蛩胤讲罘治龇椒畐,雅验进行两两比较,。转染细胞。实验分两组①对照组拗柿V侍遄H:②实琩⒂胂咝缘膒—狤载体连接,得到重组质粒,分别命名为和猵。转化感受态细菌,在氨苄抗性培养基中℃过夜培养,挑取阳性克隆,送菌液测序鉴定。H綞赴根据H臼约了得魇椴街瑁刈橹柿验组柿WH咀;转染痹谟ü庀晕⒕迪鹿鄄旌焐ü獗泶铩应用实验分别检测转染后、、、和达的变化情况,实验重复三次。采用实验检测转染后、、、和泶的变化情况,实验重复三次。。;采用最小有意义差异,结果刈橹柿5募ㄍü。ü獗泶镏刈橹柿WH綞赴螅谟ü庀晕⒕迪鹿鄄斓胶焐与对照组相比,,表达在转染后碌稻,其中,在转染锏阶畲笠种率,。
本研究应用扇偶际豕菇╬特异性干扰载体。实验已经初步证实:所构建得匾煨詓表达载体,转染食管鳞癌细胞株细胞后,能够在水平和蛋白水平对泶锸迪忠种啤U饩臀N颐墙步研究谙赴械母丛幼饔锰峁┝斯ぞ摺转染食管癌细胞后谋泶锎觤胶偷鞍姿蕉季讼认降,至墙抵磷畹停笥稚仙炼哉兆樗健T谡飧龉讨锌赡苁怯捎谒孀转染时间的推移,转染进入细胞的质粒出现丢失,而不表达隆R虼耍我们还要在转染技术方面进行提高,从而延长转染质粒的作用时间。关键词:食管鳞状细胞癌;颂翘錝っ竘;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白中文摘要讨论
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