核酸检测实验室建立与应用.ppt

文档介绍：核酸检测实验室建立与应用
卫生部临检中心深圳市血液中心血液病毒核酸检测联合实验室
叶贤林
8/9/2017
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核酸扩增检测实验室的建立
人员
场地
检测方法选择
实施方案
依据:卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号)
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核酸实验室人员要求
资质:经过临检中心PCR培训班培训并取得上岗证;通过血站核酸实验室岗前培训考试合格。
培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污染的概念③良好工作****惯的培养. ④报告的正确发放.
后备人员的培养.
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试剂准备区
标本制备区
扩增区及扩增产物分析区
样本离心交接区
报告发放区
核酸实验场地
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方法选择: TMA与PCR
TMA
PCR
扩增原理
模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程
模拟自然
DNA复制的过程
靶目标
RNA
DNA
酶
MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶
DNA聚合酶
反应体系
两种酶,两条引物,dNTP, NTP
一种酶,一对引物,dNTP
温度条件
恒温(℃)
循环导热
(变性,退火,延伸)
扩增仪器
水浴箱或者加热块
热循环仪
扩增产物
RNA
DNA
扩增速度
每个循环可以生成100-1000个复制物,在15-30分钟内可增加10亿倍复制物
以2n扩增,2~3 h就能将待扩目的基因扩增放大10亿倍
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TMA的优点缺点
自动化程度高
灵敏度高
扩增效率高:10n
不能绝对定量
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PCR的优点缺点
易于自动化
灵敏度高
扩增效率高
汇集拆分过程繁琐
拆分可减低非反应性比率
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核酸试剂质控
试剂的确认
试剂运输过程的控制(温度\条件\时限)
灵敏度的要求
内标的要求
试剂涵盖的基因型
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检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测流程
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检测流程(2):常规筛查合格单人份标本检测流程
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