文档介绍：中国农业科学院学位论文二硫键对菌丝霉素抗茵活性的影响及茵丝霉素多聚体在毕赤酵母中的表达指导教师:王建华研究员申请学位类别:理学硕士业:生物化学与分子生物学研究方向:功能蛋白和肽基因工程培养单位:中国农业科学院饲料研究所研究生院密级:论文编号:研究生:王少然专提交日期月
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基金来源本学位论文是易匀豢蒲Щ项目编号:,,北京市自然科学基金钅勘嗪牛,的部分内容。
时间:≯‘【年耭甲日关于论文使用授权的声明独创性:。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:时间:,/年占月本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。·论文作者签导师签名:莎月时间:/缸.
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摘要菌丝霉素且恢终婢烙兀愿锢际涎粜韵妇哂懈咝鄙俗饔茫苡行地抑制肺炎链球菌特别是具有青霉素抗性的肺炎链球菌的生长,对其杀菌速率与万古霉素和青霉素相当,并且对人血红细胞无溶血性,是极具潜力的抗感染药物。为进一步研究二硫键对志钚缘挠跋欤ū狙芯渴乙压菇ǔ晒Φ暮蠵二硫键突变体的重组表达载体转入毕赤酵母薪杏盏急泶铩甈治龇⑾各突变体均有表达,表达产物经葡聚糖凝胶纯化后,对各个突变体的抑菌活性进行鉴定,比较抑菌圈大小发现,瓹二硫键对咕钚杂跋旖洗螅槐涮和抑菌活性几乎全部丧失;瓹二硫键对目咕钚杂跋旖小,凡是蚣⑸槐涞耐槐涮蹇咕钚跃瓷ナВɑ钚杂胛赐槐涞腜相比活性都降低。多聚体串联表达有利于提高多肽的表达量,而且以多聚体形式的多肽更加稳定。本实验尝试在毕赤酵母中融合表达嗑厶濉首先,在毕赤酵母腥诤媳泶锏ヌ錚。在本实验室已优化的蛄讲设计了同尾酶盖形坏悖员阌诤笮嗑厶宓墓菇āT赑多肽和载体蛋白之间分别设计了甲酸或羟胺切割位点,以获得目的蛋白。将设计的单体基因重组到载体上,,疨分泌表达的总蛋白浓度达/。表达产物经镍柱纯化、化学试剂切割后,进行抑菌活性鉴定,结果发现切割后获得的单体蚉梢砸制金黄色葡萄球菌的生长,为下一步多聚体的构建奠定了基础。在单体表达研究基础上,采用同尾酶构建法构建了嗑厶濉R曰竦玫牡ヌ逯刈樵靥为基础,对重组载体分别进行双酶切和单酶切,具有相同粘性末端的线性载体和插入片段再连接。如此重复构建了厶搴退木厶濉=ǜ鞫嗑厶逵盏急泶铮琓狿治龇⑾种有二聚体表达,四聚体没有表达,原因可能是表达条件不理想,需要进行进一步的摸索。综上,本研究通过对蚣槐涮逡志钚缘募ê捅冉戏⑾郑蚣訮最大抑菌活性的保持有重要作用。同时实现了含甲酸或羟胺切点的ヌ搴投厶宓娜诤表达,为它的制备和应用奠定了基础。关键词:防御素,二硫键,多聚体,融合表达,抑菌活性疦
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录目第一章引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..研究目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.防御素研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...⑾帧慕峁埂纳镅Щ钚浴囊志啤本研究思路、目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯