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;.:钐砺学位论文作者签名:在赵Ⅲ舢删口保密,在一年解密后适用本授权书。电不保密。河北科技大学学位论文版权使用授权书河北科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定。同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于朐谝陨戏娇蚰诖颉啊獭学位论文作者签名:月日指导教师签名:年—~一一●.
×吮揭阴连接酶撸基因,⒈疚目寺×瞬魄嗝怪写。颍菇藀心耍泶镏柿并在大肠杆菌賏的明显条带,与报道的苯乙酰用该傅鞍椎睦砺鄯肿恿、№口,.,苛霉素属于荒邗9衫嗫股兀云淞菩Ш茫咕钚郧浚匀颂逑赴拘孕且价格低廉而广泛应用,是目前治疗感染性疾病的重要药物。、半胱氨酸和缬氨酸为原料的青霉素生物合成途径已有详细的阐述,通过菌种改良以获得更高产量是工业生产的重要课题。苯乙酰用在青霉素合成途径中,催化苯乙酸与从ι杀乙酰揭阴再在异青霉素;R泼的催化下,与瓵反应生成青霉素G贸瞬魄嗝怪斜嗦隤的基因办,嗝顾氐暮铣闪棵飨约跎伲因此,苯乙酰用甘乔嗝顾谿生物合成途径中,增加苯乙酸侧链前体物质利用效率的重要酶之一。因此,克隆产黄青霉的苯乙酰用富颍⒔幸煸幢达,可以为研究该酶的催化作用机制、酶的性质、对青霉素合成的影响以及代谢工程改造青霉素生产菌株奠定基础。构建了巾办,表达质粒,并在大肠杆菌惺迪至嘶钚员泶铮璑亲和层析柱纯化了蛋白,研究了幕拘灾省本研究主要研究成果如下:幸煸幢泶铩T娴臀掠盏枷拢琒凝胶电泳出现一条分子量约为恢隆重组质粒节厅,在斜泶锏拿富畲锏⒈疚目寺〉牟魄嗝怪衟办,基因所编码的苯乙酰用福ü蛄蟹治鲆及结构预测,其氨基酸序列与数据库中多个产黄青霉的苯乙酰用登录号分别为:%同源,与彳妒骹,,淞向慰冢皊’.、彳妒骹,,材月印骹,,螂/%罭褂—爿印骹,,螂Αⅲ冢.、彳印骹,,”樱皲罭锏ヒ⒋炕窹的基本性质:最适温度是℃:有一定的热稳定性;最适为:—酶比较稳定。⒉捎弥氐由霵法穕琌甈涤诩鸓定点,.。痬,.—.捅嘤
突变,获得槐渥印突变子、捅渥印突变子、变子、槐渥印突变子、槐渥印突变子和槐渥樱用于研究酶的底物特异性。产黄青霉白勺克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该酶的结构,通过定向进化,提高酶的窿化活性或改变酶的底物特异性,为青霉素生产菌的遗传改造及其组合生物合成学的研究奠定了基础。关键词苯乙酰用富欤;基因克隆;表达;纯化;产黄青霉;;定点突变;重叠延伸河北≯貉у鰅把畚
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