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⋯一:触⋯。。⋯日学位论文使用授权声明原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者日期:年
摘要内质网应激诱导肝癌细胞对阿霉素耐药的机制第一部分:肝癌组织中内质网应激与/返墓叵第二部分:探讨内质网应激与肝癌细胞对阿霉素耐药的关系背景与目的肝癌是常见的消化道恶性肿瘤,发病率及死亡率均较高。在我国,多数肝癌患者就诊时已属中晚期,丧失了手术机会,化疗成为肝癌治疗的重要手段。阿霉素是治疗肝癌的一线化疗药物,但疗效并不理想,肝癌细胞的对阿霉素的耐药现象则是导致其治疗失败的主要原因。深入探讨肝癌细胞对阿霉素产生耐药的机制十分必要。为此,国内外学者从不同角度探讨了肝癌多药耐药机制,但对内质网应激与肝癌耐药的关系甚少述及。本课题拟分三个部分从组织及细胞水平揭示内质网应激诱导肝癌细胞耐药的机制,为完善肝癌细胞耐药机制注入新的内容,为肝癌治疗提供新的思路。方法收集肝癌组织标本例,正常肝组织标本例,采用免疫组织化学技术检测皃的表达情况;取肝癌组织及正常肝组织标本各捎技术检测各组织中皃的表达情况。结果免疫组化结果及结果均显示:肝癌组织内泶锪考癆磷酸化水平均明显高于正常肝组织;且肝癌组织内牧姿化水平与谋泶锪砍氏灾喙亍第一阶段:建立肝癌细胞内质网应激模型用痬囊旅顾胤直鸫鞸癏肝癌细胞,于处理后、、,收集细胞,提取细胞总蛋白。技术检测衣霉素诱导肝癌细胞内诘鞍姿降谋泶锴榭觯籖狿技术比较衣霉素处理肝癌细胞及时趍降谋泶锛澳赬募艚忧榭觥
与啾龋旅顾卮鞸癏肝癌细胞后,诘鞍姿降谋泶锪烤飨蕴岣。攵哉兆橄啾龋旅顾卮鞸癏肝癌细胞表达量均明显提高。螅琗的剪接产物水平均明显提高。第二个阶段:明确内质网应激能否诱导肝癌细胞对阿霉素耐药方法贴壁培养肝癌细胞及⒎炙淖椋何醇右┒哉兆椤⒁旅顾卮理组及阿霉素处理组及衣霉素⒚顾卮碜椋捎肕法及流式细胞仪技术检测各组细胞生长抑制的率及凋亡率。结果衣霉素处理组、阿霉素处理组及衣霉素加阿霉素处理组细胞相对生长抑制率分别为:.%±%⒚顾处理组相比,衣霉素加阿霉素处理组的细胞相对生长抑制率明显下降哉兆椤⒁旅顾卮碜椤⒚顾卮碜榧耙旅顾丶影⒚顾卮碜榈细胞凋亡率分别为%±%、.%±%┪锎碜橄赴蛲雎示飨栽高;与阿霉素处理组相比,衣霉素加阿霉素处理组的细胞凋亡率明显下降。旅顾卮碜椤⒚顾卮碜榧耙旅顾丶影⒚%±%⒚顾哉兆椤⒁旅顾卮碜椤⒚顾卮碜榧耙旅顾丶影⒚顾卮碜榈腍细胞凋亡率分别为%±%、.%±%┪⒚顾卮碜橄啾龋旅顾丶影⒚顾卮碜榈南赴蛲雎拭显下降。摘要螅珺.Ⅱ
第三部分:探讨/吩谀谥释び盏几伟┫赴园⒚⒚:明确内质网应激与/墓叵方法用痬囊旅顾胤直鸫鞸癏肝癌细胞,于处理后、、,收集细胞,提取细胞总蛋白,技术检测衣霉素各组肝癌细胞内姿峄郊暗鞍妆泶锼健结果与啾龋旅顾卮鞸癏肝癌细胞后,。第二阶段:探讨/吩谀谥释び盏几伟┫赴鸵┲械淖饔将肝癌细胞分三组:未加药对照组、衣霉素处理组及抑制剂騑旅顾卮碜椋琖技术检测各组肝癌细胞内牧姿峄健A斫玈伟┫赴炙淖椋何醇右┒哉组、阿霉素处理组、衣霉素⒚顾卮碜榧癙种萍或衣霉素⒚顾卮碜椋捎肕法及流式细胞仪技术检测各组细胞生长抑制的率及凋亡率。与对照组相比,衣霉素处理组及旅顾卮碜榈泶锪课廾飨员浠;与对照组相比,衣霉素处理组及旅顾卮碜锳的磷酸化水平明显提高阿霉素处理组、%±%⒚顾卮碜橄啾龋旅顾丶影⒚顾卮碜榈南赴旅顾阿霉素处理组的细胞相对生长抑制率仍低摘要。:Ⅱ
结论。激诱导肝癌细胞綜对阿霉素的耐药现象。处理组綜细胞相对生长抑制率分别