文档介绍：院学位论文功能初步分析哈茨木霉一基因的克隆及硕士研究生:冀颖指导教师:蒋细良研究员申请学位类别:理学硕士业:微生物学研究方向:微生物药物工程培养单位:植物保护研究所研究生院论文编号:专提交日期月一
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翩盘名:伽召帆辨钼姻援救援始独创性声明关于论文使用授权的声明时间珈辍拢时间:障钼肜日本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特另员曜⒑椭滦坏牡胤酵猓文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示研究生签名:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。论文作者签名:了谢意。C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵
‘\书卧袁彦歹脓汉,汞;拢右杪三’中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目哈茨木霉一基因的克隆及功能初步分析冀颖专业微生物微生物药物工程蒋细良芯培养单位芯植物保护研究所职称硕签名论文作者研究方指导教师姓名单位评硕导口中科院微生物所微生物学李少杰研究员博导√中国农业大学农学与人王琦教授植物病理学生物技术学院答辩中宋渊农业微生物院微生物系中国农业科学院植物邱德文保护研究所锨张杰保护研究所答辩中国农业科学院农业李俊资源与农业区划研究博导、/委所博导口会议记录厥李梅论文答辩时间地点月障挛:南区中同中心阅贝口
寺〖付≈屎铣擅富虻秎仇渭捌淙ǔ秆〖付≈屎铣擅富蝽赋餭敲除突变体摘要茨木霉一基因组中,根据同源重组原理,使潮霉素基因表达盒替换砀珊,,其厚垣孢子制剂为其未来最具潜力的开发方向。厚垣孢子显著特征为细胞壁增厚,而几丁质作为菌丝及孢子细胞肇的主要成分,对维持细胞的结构和功能具有重要作用,其合成关键酶为几丁质合成酶眛蓿.。因此,研究术霉菌几丁质合成酶基冈,探索几丁质合成机制,对于研究细胞壁形成过程,进而开发以厚垣孢子为主要成分的木霉菌制剂具有重要意义。本文通过扩增哈茨木霉中的几丁质合成酶基因,构建’质合成酶突变体,观察表型变化,初步探究其功能,结果如下:将上注册的株丝状真菌几丁质合成酶基冈的序列进行榷裕业奖J匦蛄校源为基础设计简并引物,以哈茨木霉基因组作为模板,进行┰龅玫匠ざ任的序列。在上进行榷裕⑾钟肷昕随咦铀烤的几丁质合成酶基因相似性为%。故在此基础上进行染色体步移,共扩增得至镄畔⒀Х治黾付≈屎铣擅富詒騡生物信息学比对结果表明登录号嗦肭长为,由鐾庀宰雍个内含子组成,开放阅读框嗦个氨基酸。进行序列比对及同源性分析显示,该基因与串珠状赤霉珹付≈屎铣擅富蛳嗨菩宰罡撸直鹞ァィ幌嘤的氨基酸序列同源性均为%,系统进化分析表明属于Ⅲ型几丁质合成酶亚家族。含有鯟峁褂颍一结构域,鯟峁褂颍个跨膜结构域,为膜结合蛋白。预测三维结构表明其含有糖基转移酶的保守峁褂颉菇ḿ付≈屎铣擅富騎槐涮以潮霉素基因作为筛选标记,在其两侧插入的徊嘁硇蛄长度为蚑的嘁硇蛄长度为魑M幢郏徊捎妹盖幸涣臃ǎü菇ǖ闹刈槠斡胨T靥/相连构建打靶载体海篽:采用农杆菌介导转化法将打靶载体导入哈转化子。经过连续五次传代培养后,株仍具有潮霉素抗性,’侧翼序列以及被敲除的序列,筛选得到几丁质合成酶基因傲除突变体;以潮霉素基因为探针,以敲除突变株以及具有表型差异的转化子籰,,,,胍吧突蜃镈为模板,进行分析,检测迦肭榭觥治黾付≈屎铣擅富虻秎瑿傲除突变体的表型变化情况以野生型菌株为对照,将菌丝进行染色后,荧光显微镜下观察发现,野生型菌株菌丝内部染色均匀且深,在隔膜处染色更深,而突变体菌丝中染色较浅,说明缺失后,几丁质合成量明显减少。此外,显微观察发现,突变体的菌丝内部径向膨大形成厚垣孢子;分生孢子梗分支减少,长度增长;但生长速度,产色素量,产孢量与野生型没有明显区别。关键词几丁质合成酶,,同源重组,基因敲除,功能分析哈茨木霉.。
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英文缩略表英文缩写英文全称中文名称十二烷基磺酸钠土豆葡萄糖琼脂培养基聚合酶链式反应脱氧核糖核苷酸双蒸水光密度值琼脂糖缬净撼逡每分钟转数碱基对开发阅读框根癌农杆菌介导的转化编码序列/.Ⅵ瓸
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