文档介绍：博士研究生:田德斌指导教师:袁世山研究员申请学位类别:农学博士专业:预防兽医学研究方向:兽医微生物及其分子生物学培养单位:上海兽医研究所研究生院提交日期月
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矾知奶∥五融锄棚彳吨弼净兽曼毋窘所、汊芝兰夕中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表\‘乏多签名≮‘⋯.瑀,#嵌合动脉炎病毒的构建及其病毒学特性研究方向及其分子生物学培养单位芯克⒅行论文题目兽医微生物论文作者田德斌专业预防兽医学指导教师袁世山研究员姓名职称单位专业评盲评华修国教授上海交通大学复旦大学微生物学孙建和马志永研究员上海兽医研究所丁铲委于圣青周金林会议记录厥论文答辩时间地点年日,上海兽医研究所室阅人放辩主席钟江答顾惠明贝一‘:口《、
一龇、习钹珲帆丛日弓友舛研究生签名:多月丫同卜彳匆饵独创性声明关于论文使用授权的声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:镜脚┮悼学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,口了以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。时间:导师签名:·
摘要本病毒讯嗨频目瞻咝翁凰星逗喜《驹贛上的复制能力与亲本病毒相似。年成立的动脉炎病毒科涑稍卑ǎ郝矶鲅撞《琒。动脉炎病毒感染动物后能引起从无临床症状的持续性感染剑致死的急性感染不等的病征。其中腥局硪鹚降摹爸砝抖备澜缪硪荡淳薮经济损失。目前涉及到动脉炎病毒复制过程的分子机制,尤其是囊膜蛋白结构与功能的关系还不清楚。在本实验室已经拥有的虴全长感染性克隆的基础上,本研究利用反向遗传操作方法对动脉炎病毒的囊膜蛋白功能、基因转录调控等进行了解析,促进了对动脉炎病毒的进一步了解,为防治捌渌鲅撞《镜於艘欢ǖ睦砺刍煌蛐蚉嵌合体的构建及其病毒学特性治A礁龌蛐停騦型与基因停叫椭浠蛳嗨菩越鑫プ笥摇6员实验室拥有的蚉株与蚉株斜榷苑⑾制淠夷さ鞍譍、之间的相似性在ブ洹R型娜ǔじ腥拘钥寺盖形坏悴迦隣与涔菇ㄈǔた寺。再以为骨架,将其—、.。用如上构建的嵌合克隆和H綧细胞,,分别为甋。间接免疫荧光腿ǔば蛄胁舛ń峁な盗俗硬《镜那逗匣蜃榻峁埂=炔《驹谔逋饬代至第蟛庑虮砻髑逗喜《居泻芎玫幕蛭榷ㄐ浴S媚芴匾煨允侗型夷さ鞍椎抗体进行治霰砻鱨型蚰茉型骨架杏行П泶铩6哉瘸龅那逗喜毒进行病毒学特性研究发现:。采用方法和特异性引物对,从病毒感染细胞的总欣┰龀龈鞲鲅腔蜃閙P蛄胁舛ǚ⑾郑核淙涣叫蚉位于结构蛋白基因中的转录调控序列,瓸灰恢拢莑型瓸能与偷奈挥’械淖B嫉骺匦蛄,互相作用形成相应的杂合瓸与蚑。罨涞牟痪放涠缘贾禄蜃橹幸恍㏕.嗨菩蛄蟹⒒幼饔茫。本研究首次获得了不同基冈型合的感染性子病毒,阐明了蚉的囊膜蛋白能在蚉中发挥功能,从理论上表明两型淇赡芊⑸刈椤U馕=徊窖芯縋囊膜蛋白结构和功能的关系、开发基因标记疫苗奠定了理论基础。煌侄鲅撞《厩逗咸宓墓菇ḿ捌洳《狙匦,猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒乳酸脱氢酶升高病毒琇锍鲅H炔《为骨架,先将:由于了一些比经典小的亚基因组琍猠,
.、.。用构建的嵌合克隆转染.⑾挚寺瓻能拯救出感染性的子病毒.。。对第《静庑虮砻髑逗喜《驹谔逋饩哂泻芎玫幕晕定性。《狙匦匝芯糠⑾郑呵逗喜《緑瓻竦昧斯┨迩本病毒南赴腥酒祝四芨腥境齅外还能感染蚔赴ú荒感染骨架亲本病毒奶迥诎邢赴恢矸闻菥奘上赴;.能在转录谱和序列进行分析发现:!1狙芯坎坏谑澜缟鲜状纬晒竦昧瞬同种动脉炎病毒之间完整婊坏木哂懈腥拘缘那逗喜《荆匾5氖鞘状未右糯Ш筒《学的角度阐明少量囊膜蛋白在动脉炎病毒侵入细胞过程中发挥决定性作用。该研究同时提供了一种生产高滴度姆椒ǎ欣谝呙缟迦肭逗咸宥鲅撞《镜墓菇ḿ捌洳《狙匦上一项的研究表明腛梢栽赑中稳定存在并发挥功能,且已知另外一个动脉炎病毒基因组中拥有譕8孟钛芯吭谝陨涎芯炕∩弦匀珆感染性克隆9羌埽獷的插入蚈之间,构建了嵌合克隆。用该克隆转染细胞拯救出了具有感染性的插入嵌合病毒。秃怂嵝蛄胁舛ń峁な盗俗硬《镜幕蜃榻峁固氐闱也迦牖蚰苡行П泶铩Q芯糠⑾在稳定存在的同时陨淼腛