文档介绍：该【根癌农杆菌介导法课件 】是由【yzhfg888】上传分享，文档一共【15】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【根癌农杆菌介导法课件 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。植物基因工程
——根癌农杆菌介导法
——农杆菌
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤或发状根。
——原理
根癌农杆菌的细胞内有一个大的致瘤质粒,简称Ti质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。
因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系,改造的Ti质粒就是一个优良的植物转基因载体。
——Ti质粒结构特点
转移到植物基因组中的DNA序列,与肿瘤形相关。
激活T-DNA的转移,使植物致瘤,是毒性区。
调控Ti质粒在根癌农杆菌之间的转移,是接合转移编码区。
调控Ti质粒的自我复制,为复制起始区。
Ti-质粒的基因结构
T-DNA区
(transferredDNAregion)
Vir区
(virulenceregion)
Con区
(regionencodingconjugation)
Ori区
(originofreplication)
——Ti质粒的改造 策略
由于野生Ti质粒直接作为植物基因工程载体,存在许多障碍,故对野生型Ti质粒可以采取两种不同的改造策略——一元载体系统和二元载体系统。
相较而言,二元载体更多优点:
1、构建方便;2、效率高;3、不会带人大量无用的冗余DNA序列。
——二元载体
基本原理:T-DNA区与Vir区不在同一个载体上,Vir区通过反式作用使T-DNA区发生转移。
微型Ti质粒
根癌农杆菌
辅助Ti质粒
外源基因微型Ti质粒含有辅助Ti质粒的根癌农杆菌植物
缺失Vir,T-DNA卸甲,引入酶切位点
去掉T-DNA去
——T-DNA导入植物 基因组的过程
一、农杆菌对受体的识别
菌株对植物细胞所释放的化学物质产生趋向性。
二、农杆菌附着到受体细胞
创伤部位生存了8~16h(细胞调节期)的菌株才能诱发肿瘤。期间,农杆菌产生纤丝将自身缚附在植物细胞壁表面。
——影响T-DNA 转移的因素
农杆菌菌株
菌株侵染力:农杆碱型菌株>胭脂碱型菌株>章鱼碱型菌株
农杆菌菌株高侵染活力的生长时期
~
基因活化的诱导物
常用诱导物:乙酰丁香酮(AS)、羟基乙酰丁香酮(HO-AS)
外植体的类型和生理状态
发育早期的组织细胞具有很强的分裂能力,这些组织发生创伤活环境诱导时,加速分裂,处于转化的敏感期。