文档介绍：实验一
差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量
目的要求
掌握差示分光光度法消除复方制剂干扰组分的原理。
熟悉差示分光光度法的基本测定方法。
基本原理
差示分光光度法(简称ΔA法)是利用在两种不同pH介质中或经适当的化学反应后,供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化,而干扰组分不受这些变化的影响,光谱行为不发生改变。取两份相等的供试溶液,用两种不同pH的介质处理或经适当化学反应后,稀释至同样浓度,一份置样品池中,另一分置参比池中,由于样品池和参比池中干扰物浓度相等,因此干扰物吸收度的差值为零(即ΔA=0),供试溶液的吸收度差值(ΔA值)只与被测物浓度成正比,从而消除了干扰。可以用标准曲线法或标准对比法计算出待测组分的含量。分光光度法既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点,又无须事先分离,并能消除干扰。
复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄与甲氧苄啶组成,在酸性溶液和碱性溶液中,甲氧苄啶的紫外吸收光谱发生改变,而头孢氨苄的吸收光谱基本不变,因此不经分离可用差示分光光度法直接测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量。
仪器与试剂
紫外-可见分光光度计,50mL量瓶,100mL量瓶;甲氧苄啶对照品,头孢氨苄对照品,复方头孢氨苄胶囊,醋酸,。
操作步骤
对照品溶液的配制
分别取甲氧苄啶对照品约25mg,头孢氨苄对照品约125mg,精密称定,分别置于50mL量瓶中,加稀醋酸2mL溶解后加水稀释至刻度,摇匀,各精密吸取5mL,2份,分别置于100mL量瓶中,一份用水稀释至刻度,。
差示吸收曲线的绘制
将两种不同介质的头孢氨苄溶液和甲氧苄啶溶液分别以相应为空白,在200~350nm波长范围扫描,绘制吸收光谱。
将上述用水稀释的对照品溶液置于参比池中,,绘制甲氧苄啶和头孢氨苄的差示光谱。甲氧苄啶差示吸收曲线(见图15-1)显示在约293±1nm波长处有最大ΔA值,在此波长处头孢氨苄的ΔA值几乎等于零,因此293±1nm处的ΔA值与甲氧苄啶浓度成正比。故选用293±1nm作为甲氧苄啶的测定波长,可以不经分离直接测定甲氧苄啶的含量。
含量测定
取复方头孢氨苄胶囊20粒,精密称定,倾出内容物混匀。胶囊壳用小刷子拭净,精密称定囊壳重量,计算胶囊的平均装量。精密称取内容物适量(约相当于甲氧苄啶25mg),置于50mL量瓶中,加稀醋酸2mL溶解后加水稀释至刻度,摇匀,过滤,精密吸取续滤液5mL,2份,自“分别置于100mL量瓶中……”起,照“对照品溶液的配制”项下方法操作。于293±1nm波长处分别测定对照品溶液和样品液的ΔA值。计算相当于标示量的百分含量。
式中:ΔAu为供试液的ΔA值;ΔAs为对照液的ΔA值;Cs为对照液浓度(mg/mL);D为稀释倍数;W为取样量。
甲氧苄啶头孢氨苄
操作注意事项
由于仪器波长可能有差异,因此在选择测定波长时应根据绘制的差示光谱选取头孢氨苄ΔA值几乎等于零的波长为测定波长,否则将影响甲氧苄啶含量测定的准确性。
思考题
为什么采用差示分光光度法能消除头孢氨苄对甲氧苄啶测定的干扰?
差示分光光度法有哪些优点?
[参考文献]
刘文英等,药物分析,人民卫生出版社199