文档介绍：大学生物实验——核酸的提取与检测
李长红
lichanghong0716@
**********/611925
曹光彪科技楼421室
一、实验目的与要求
1、学****并掌握细菌基因组DNA的提取原理和方法;
2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作;
3、学****并掌握对电泳检测基因组DNA结果的初步分析。
二、实验原理
细菌(bacteria)为原核微生物的一类,是一类形状细短,结构简单,多以二分裂方式进行繁殖的原核生物。
根据革兰氏染色法,可将细菌两大类:革兰氏阳性菌和阴性菌。两者主要是细胞壁的结构不同。
常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。
二、实验原理
大肠杆菌(Escherichia coli)是人和动物肠道中最著名的一种细菌,主要寄生于大肠内,约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。
二、实验原理
细菌染色体(chromosome of bacteria):由一条双股环状DNA分子组成,附着在横隔中介体或细菌膜上。细菌染色体无组蛋白包绕。
细菌染色体上的基因与真核细菌不同,无内含子,转录后形成的mRNA不必再剪切、拼接,可直接翻译成多肽。
~ mm,是菌体长度的1000倍。
二、实验原理
细菌基因组DNA提取原理:
采用细菌裂解液使细菌裂解,并裂解液中的DNA高效特异性的结合到硅基质离心吸附柱上,而其它污染物可流过膜,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。
纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-TimePCR、文库构建、SouthernBlot、分子标记等下游实验。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳原理:
,带负电荷,在一定强度电场力的作用下,从负极向正极迁移。
电泳样品载体琼脂糖是一种线性多糖聚合物,煮沸冷却后形成网格样结构,电泳中起分子筛作用。通常情况下,分子量大的DNA电泳过程中由于受到的阻力较大,泳动速率较慢,反之,分子量较小的DN***段跑在前面。
二、实验原理
溴化乙锭染色法原理:
溴化乙锭(EB)是一种荧光染料,常在琼脂糖凝胶电泳中用于核酸染色。
在紫外光的照射下,未与核酸结合的EB可被激发出橙红色荧光,在与DNA或双股RNA结合时,荧光强度会增强20倍,这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间,在紫外线激发下,发出红色荧光。
三、仪器及试剂
1. 仪器及器材
恒温水浴锅、台式离心机、移液器、电泳槽、电泳仪;离心管(灭菌)、吸头(灭菌)

细菌基因组DNA提取试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)、蛋白酶K、无水乙醇、琼脂糖、核酸电泳缓冲液、DNA分子量标准、核酸凝胶上样缓冲液
四、实验步骤
(一)试剂盒提取大肠杆菌基因组DNA
试剂盒组成