文档介绍：中国农业科学院学位论文密级:内研水稻、玉米叶绿体蛋白组学的研究和玉米叶绿体转化体系的建立硕士研究生:王金辉指导教师:张志芳研究员申请学位类别:理学硕士业:生物化学与分子生物学研究方向:叶绿体基因工程培养单位:生物技术研究所研究生院论文编号:专月
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:力月狗日沙月洳日独创性关于论文使用授权的声明甓嗟貉羧果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发研究生签名:本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究作及取得的研究成表或撰写过的研究成果,也不包含为扶得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同鞯耐径员狙芯克龅娜魏喂毕拙言诼畚闹凶髁明确的说明并表示了谢意。时间:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:,
列芝枷式‘\\\\.砂蠕彦躲伊似旷’/鱨士学位论文评阅人、答辩委员会签名表≥‘\√中国农业科学院水稻、玉米叶绿体蛋白组学的研究和玉米叶绿体转化体系的建立论文作者研究方向指导教师张志芳培养单位芯克生物技术研究所硕职称专业导师博导酉论文题目生物化学与叶绿体基因王金辉分子生物学工程姓名单位签名评中国农业科学院作物叶兴国研究员博导团科学研究所阅人胡英考副教授硕导回首都师范大学辩硕导口中国农业科学院饲料姚斌研究所教授级中国食品发酵工业研王璋微生物学高工博导口究院伍宁丰硕导函中国农业科学院生物技术研究所答中国科学院过程工程邢建民张维副研究硕导仍委会议记录厥论文答辩时间地点生物所年楚主席贝口,
摘要叶绿体是细胞核外存在遗传物质的细胞器之一,但是叶绿体基因组仅编码种蛋白质,叶绿体代谢所需的其它蛋白质都是有核基因组编码。由于叶绿体的膜结构比较复杂,叶绿体蛋白质的提取、分析比较困难,对完整的叶绿体蛋白组学研究是一种挑战,仅限于拟南芥等植物,在水稻、玉米中还未进行深入研究。当前随着分子生物学技术的发展,特别是质谱技术的发展,蛋白组学向着高通量、高灵敏度方向发展,使叶绿体完整蛋白组学的研究成为可能,利用最新发展的技术,并与传统技术相结合,我们对重要的粮食作物玉米、水稻的叶绿体蛋白组学进行了研究。首先通过超速离心纯化出完整的玉米、水稻的叶绿体,优化传统叶绿体蛋白的提取方法,获得较高水平的叶绿体可溶性总蛋白,进行蛋白电泳,通过质谱技术进行分析,结果获得玉米叶绿体总蛋白郑赑薪斜榷苑治觯魅范ㄎ辉谝堵烫宓挠种,定位在胞质中的有郑吡L宓郑翰⒓中露ㄎ辉谝堵烫宓牡鞍字剩换竦盟疽堵烫遄艿鞍字郑隤斜榷苑治觯魅范ㄎ辉谝堵烫宓挠种,细胞质的有种,线粒体的有种。以上经与比对分析结果表明定位在细胞质、线粒体的蛋白质,可能在叶绿体中也存在,它们在中大部分是预测的蛋白质,但是本研究的质谱分析首次初步认定这些蛋白质为表达的蛋白。本研究通过对玉米、水稻的叶绿体蛋白组学研究,为叶绿体蛋白组学提供更多的信息,对叶绿体中光合系统、各类酶类、代谢途径等方面的研究提供依据。叶绿体转化是利用同源重组的原理将目的基因定点重组到叶绿体基因组中,从而使目的基因在叶绿体中进行表达。叶绿体转化体系具有表达效率高,环境安全性好等优势。叶绿体转化已经在衣藻、烟草、拟南芥、水稻等植物中取得成功。本研究以重要粮食作物玉米为研究对象,构建玉米叶绿体表达载体,通过基因枪的方法转化玉米愈伤组织,以期建立玉米叶绿体转化体系。首先克隆了玉米叶绿体的钠舳觩和终止子⒍云舳咏辛擞呕基因的序列及与翻译有关的核苷酸序列,以增强该启动子的翻译能力。设计引物克隆三对约的基因片段:、,、和、,作为目的基因与叶绿体基因组进行同源重组的同源片段,选择优化后的除草剂抗性基因魑D康幕颍猿泵顾抗性作为筛选标记,构建获得玉米叶绿体转化载体甈、Mü蚯沟姆椒ㄗ化玉米愈伤组织,目前正在分化筛选,以期获得玉米叶绿体再生植株,建立玉米叶绿体转化体系。关键词:叶绿体蛋白组学,质谱分析,,叶绿体转化,草甘膦
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目录第一章引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯叶绿体蛋白质组学研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...鞍鬃檠а芯康南喙丶际酢!.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...堵烫遄;;;纳秆”;饩龅奈侍狻抗草甘膦植物的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..莞熟⒌⒆