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等趁⋯~:截起撇名:矽长、罗芗、罗李芝翩虢礅农月日期加日期:如月≥日日期:/’月导师签名:厶Ⅸ/‘眇弋海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明学位论文版权使用授权说明所晕交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名:本人完全了解海南入学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果,知识产权归属海南大学。保密论文在解密后遵守此规定。日期:年本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖菘夥⒉颊鲁獭保饨ū救说难宦文提交“咝Q宦畚娜氖菘狻敝腥姆⒉迹⒖砂础罢鲁獭敝泄娑ㄏ硎芟喙本人郑重声明:月日
摘要对于毒液中芋螺毒素神经肽的体内氧化折叠至关重要。本研究主要得到以下实验芋螺舾棺愀儆舐菘频娜馐承院Q笕硖宥铮蛟多种。。研究者普遍认为每种芋螺可能含有痔匾斓挠舐荻素,这意味着全球约有钟舐荻舅亍S舐荻舅赝ǔJ怯刹欢嘤龅陌基酸残基组成,富含二硫键,化学结构新颖,生物活性强,作用靶位的选择性高,目前发现的芋螺毒素超家族主要有珹.,琈.,。它们己在神经科学研究领域和新药研制方面受到了前所未有的广泛关注,因此对芋螺毒素进行深入研究意义重大。蛋白质二硫键异构酶是内质网新生肽链折叠中一个重要的折叠酶。在热带药用海洋生物芋螺的毒液中,富含福妹结果:饕2捎媚汗瞬阄龊椭票感蚏液相等电聚焦电泳等多种方法,。肞方法克隆得到三种海南产桶形、疣缟和织锦芋螺的及序列,然后进一步亚克隆获得酶切位点用于表达载体的构建。关于颍我们成功构建了霰泶镌靥澹直鹞#簆一·、的成熟肽基因,每种毒素的成熟肽基因都分为有终止密码子和没有两种,可以相应的表达出不带甌和带甌的芋螺毒素肽。、蚉是止菇ǔ晒Φ腗的表达载体。菇ǖ牟糠直泶镌靥錺.、蚉进行了原核诱导表达的研究,并在大肠杆菌菌株中成功的表达了傅鞍⒉淮鳫标签的芋螺毒素⒋鳫标签的芋螺毒素痛鳫—昵┑挠舐荻舅豈.。由于芋螺毒素的氧化折叠非常复杂,且氧化折叠后具有正确二硫键连接方式的芋螺毒素才具有各种药理活性,因此,本研究结果为后续冈谥掷喾倍嗟芋螺毒素氧化折叠中的应用及其作用机制研究提供了重要的物质基础。关键词:芋螺毒素蛋白质二硫键异构酶氧化折叠基因克隆原核表达
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目录舐萆镅А舐荻舅匮芯扛攀觥芋螺毒素的分类与命名⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芋螺毒素的分子生物学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芋螺毒素的翻译后修饰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芋螺毒素的药理学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芋螺毒素的获取途径⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.芋螺毒素氧化折叠与蛋白质二硫键异构酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.芋螺毒素的研究前景⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.狙芯康哪康囊庖寮凹际趼废摺本研究的目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.笛椴牧虾鸵瞧鳌实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯:⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯试剂和缓冲液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.分子生物学和纯化试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯仪器和设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.笛榉椒ā璴客靶斡舐荻疽旱鞍椎奶崛毒液蛋白的凝胶过滤层析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯.毒液蛋白的等电聚焦电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.甌质谱鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯富钚约ā峁敕治觥桶形芋螺毒液总蛋白的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.毒液蛋白的凝胶过滤层析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⒈泶镌靥骞菇ㄓ胗盏