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技术研究发展规划本研究由国家“手’’
时间:≯/曷日砰坼瑶溽及吖殍独创性声明关于论文使用授权的声明时间享絝年多月叫日≥暌字弧踻本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:时阊:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:
筘’笏以\\。中嘶唾一耘。猁远轰彳厶中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表牛精子消减文库的筛选及差异表达基因的分析论文作者专业研究方向指导教师王栋培养单位芯克北京畜牧兽医研究所职称硕单位签名论文题目岳洋姓名动物遗传动物繁殖育种与繁殖理论与技术评硕导口博导口阅人答辩朱世恩教授博导团中山东农科院奶牛仲跻峰研究员研究中心中国农业科学院北京曹文广畜牧兽医研究所副研硕导团敖红究员朱化彬委会议记录厥杜卫华论文答辩时间地点/泄┮悼蒲г罕本┬竽潦抟窖芯克嵋槭主贝’一一
摘要雄性哺乳动物可同时产生×.、精子,研究两种精子的转录本对于揭示精子发育过程中的基因表达具有重要理论意义,同时在家畜性别控制技术研究中也具有重要的地位。传统观点认为,相邻精子的基因表达产物通过细胞问桥被共享,检测两种性别精子的表达差异已没有意义,然而目前没有证据表明细胞间桥使所有的表达产物共享。为研究二精子间基因表达差异情况,。本研究采用芯片技术与序列同源性分析相结合的方法对文库中的差异表达基因进行筛选和分析,。.、精子消减的筛选采用芯片技术对已构建的牛酉鮡目饨猩秆 8菸目獾男蛄中信息,选取龃硭衭的炕锏阒屏薱酒环直鹬票竫.、精子总⒔辛铰謒咝岳┰觯ǖ玫降腶醋B嘉猠俣詂行荧光标记;将芯片与标记的杂交。采用砑治张生物学重复芯片的数据,获得个阳性差异表达,即阳性差异表达,,个在又猩系鳌钜毂泶锘虻男蛄型葱苑治对经过芯片杂交验证的阳性差异表达基因的比对结果显示,⑹偷牡鞍字矢叨韧×,其中龌蛟又猩系鳎个基因在又猩系鳎⑶艺个基因都与精子的基础生命活动相关。对剩余差异表达基因的比对结果显示,.%的个个肱菘庵械男蛄懈叨韧畍×.衔J俏粗9δ艿幕颍渲个基因在精子中上调,。其余.%×.衔?赡苁切禄颉对两个基因表达情况的检测对阳性差异表达基因细胞色素珻和铁硫簇支架蛋白基因,赬.、精子中的表达情况进行检测,,验证了芯片筛选的准确性。本研究证明了在细胞间桥存在的前提下,二精子间仍然存在差异基因表达产物,为进一步研究精子发育过程中的基因表达奠定了理论基础,同时为深入进行幼B妓胶偷鞍水平的基因表达研究提供理论依据和技术支撑。关键词:牛樱目馍秆。钜毂泶锘颍琧酒瑀畉甊畉畇
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目录第一章文献综述⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.觤丛醇按嬖谝庖宓难芯俊璴一精子间是否存在表达差异的争论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.消减文库的筛选及差异表达基因分析方法的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯.种葡踉咏患际跫捌湓谏撤⒂》⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..第二章实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.精液及组织样品来源⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.主要软件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.主要溶液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第三章实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芯片的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...秆∥目獾睦┰┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...幼躌的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..幼躌质量评估⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.芯片杂交样品线性扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..谝宦窒咝