文档介绍：南昌大学实验报告
学生姓名: 学号: 专业班级:
实验类型:√验证□综合□设计□创新实验日期: 实验成绩:
实验四微生物数量的测定
一、实验目的:
1了解血球计数板测定微生物数量的原理;
2 了解血球计数板的结构,学****并掌握血球计数板计数微生物数量的技术,包括样品的点样、菌数计数的方法与计算;
二、实验基本原理:
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板;一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,故细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个方格网。每个方格网共分9大格,其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种:一种是大方格分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即每个大方格都由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm,则每一大方格的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2,盖上盖玻片后,,所以每个计数室(大方格),每个小方格的体积为l/4000mm3。使用血球计数板直接计数时,先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
本方法适用于细胞数较多的样品测定(每毫升105~106以上),当样品中的细胞浓度较低时,须选择其他方法测定,否则因误差太大而影响实验结果。
图血球计数板的构造
(中间平台分为两半,各刻有一个方格网)
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血球计数板计数网的分区和分格
三、主要仪器设备及耗材:
显微镜、血球计数板、盖玻片(22mm×22mm)、吸水纸、滴管、擦镜纸、酵母菌液
四、实验步骤:
(1)取洁净的血球计数板一块,在计数室上盖上一块盖玻片。
(2)将酵母菌液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多),使菌液沿两玻片间自行渗入计数室,勿使产生气泡,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上,然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
(3)静置约5分钟,先在低倍镜下找到计数室后,再转换高倍镜观察计数。
(4)计数时用16中格的计数板,要按对角线方位,取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外,还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能