文档介绍：该【各种缓冲液配方 】是由【美梦成真Y】上传分享，文档一共【14】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【各种缓冲液配方 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
50×TAEBuffer
组份浓度2MTris-醋酸,100mMEDTA
配制量1L
,置于1L烧杯中;
Tris
242g
Na2EDTA·2H2O
,充分搅拌溶解;
,充分搅拌;
,室温保存;
10×TBEBuffer
组份浓度890mMTris-硼酸,20mMEDTA
配制量1L
,置于lL烧杯中;
Tris
108g
Na2EDTA·2H2O
硼酸
55g
,充分搅拌溶解;
,室温保存;
10×MOPS3-吗啉基丙磺酸Buffer
组份浓度200rnMMOPS,20mMNaOAc,10mMEDTA
配制量1L
,置于1L烧杯中;
,搅拌溶解;
;
;
1MNaOAcDEPC处理
20ml
20ml
;
;
;
注:溶液见光或高温灭菌后会变黄;变黄时也可使用,但变黑时不要使用;
溴乙锭10mg/ml
组份浓度10mg/ml溴乙锭
配制量100ml
,加入到100ml容器中;
,充分搅拌数h完全溶解溴乙锭;
,室温避光保存;
;
注意:溴乙锭是一种致癌物质,必须小心操作;
Agarose凝胶
×TBE或1×TAE;
,准确称量琼脂糖粉,加入适当的锥形瓶中;
%容量;
注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一;
,并在膜上扎些小孔,然后在微波炉中加热熔化琼脂糖;加热过程中,当溶液沸腾后,请戴上防热手套;小心摇动锥形瓶;使琼脂糖充分均匀熔化;此操作重复数次,直至琼脂糖完全熔化;必须注意,在微波炉中加热时间不宜过长,每次当溶液起泡沸腾时停止加热,否则会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉;熔化琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完全熔化,否则,会造成电泳图像模糊不清;
℃左右,如需要可在此时加入溴乙锭溶液终浓度µg/ml;并充分混匀;
注:溴乙锭是一种致癌物质;使用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套;
,然后在适当位置处插上梳子;凝胶厚度一般在3~5min之间;
~1h,然后放置于电泳槽中进行电泳;
注:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存2~5天;
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
琼脂糖浓度
最佳线形DNA分辨范围bp
%
%
%
%
%
%
1,000~30,000
800~12,000
500~10,000
400~7,000
200~3,000
50~2,000
6×LoadingBufferDNA电泳用
组份浓度
30mM
EDTA
36%V/V
Glycerol
%W/V
XyleneCyanolFF
%W/V
BromophenolBlue
配制量500ml
,置于500ml烧杯中;
EDTA
BromophenolBlue
250mg
XyleneCyanolFF
250mg
,加热搅拌充分溶解;
,使用2NNaOH调节pH值至;
,室温保存;
10×LoadlngBufferRNA电泳用
组份浓度
10mM
EDTA
50%V/V
Glycerol
%W/V
XyleneCyanolFF
%W/V
BromophenolBlue
配制置10ml
,置于10ml离心管中;
200µl
BromophenolBlue
25mg
XyleneCyanolFF
25mg
,充分搅拌溶解;
,充分混匀;
,室温保存;
四、核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法
20×SSC
,·2H2O柠檬酸钠
配制量1L
,置于lL烧杯中;
NaCl
Na3citrate·2H2O
,充分搅拌溶解;
3滴加14NHCl,调节pH值至后,加去离子水将溶液定容至1L;
,室温保存;
20×SSPEBuffer
,,
配制量
,置于lL烧杯中;
NaCl
NaH2PO4·H2O
Na2EDTA·2H2O
,充分搅拌溶解;
;
;
,室温保存;
50XDenhardt’S溶液
1%W/V
Ficoll400菲可400/水溶性聚蔗糖400
1%W/V
Polyvinylpyrrolidone
聚维***/聚乙烯吡咯烷***
1%W/V
BSA
组份浓度
配制量500ml
,置于500ml烧杯中;
Flcoll400
5g
PoLyvlnylpyrrolldone
5g
BSA
5g
,充分搅拌溶解
;
µm滤膜过滤后,分装成每份25ml;
5.-20℃保存;
;
配制量lL
·7H2O置于lL烧杯中;
;
%的H3PO4浓磷酸调节溶液pH值至;
;
,室温保存;
SalmonDNA鲑鱼精DNA
组份浓度10mg/mlSalmonDNA
配制量约100ml
,加入约200ml的TEBuffer;
2用磁力搅拌器室温搅拌2~4h,溶解后加入4ml的5MNaCl,;
/***仿各抽提1次;
,使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次,以切断DNA;
;
,溶解于100ml的去离子水中;测定溶液的OD260值;
,稀释DNA溶液至10mg/ml;
,分装成小份1ml/份;-20℃保存;
,迅速冰浴冷却;
DNA变性缓冲液
,
配制量1L
,置于lL烧杯中;
NaCl
NaOH
20g
,充分搅拌溶解;
,室温保存;
预杂交液/杂交液DNA杂交用
6×
SSC或SSPE
5×
Denhardt’s
%W/V
SDS
100µg/ml
SalmonDNA
组份浓度
配制置100ml
,置于200ml烧杯中;
20×SSC或SSPE
30ml
50×Denhardt’s
10ml
10%SDS
5ml
10mg/mlSalmonDNA
1ml
dH2O
54ml
,使用µm滤膜滤去杂质后使用;
预杂交液/杂交液RNA杂交用
6×
SSC或SSPE
5×
Denhardt‘s
%W/V
SDS
100g/ml
SalmonDNA
50%V/V
Formamlde
组份浓度
配制量100mL
,置于200ml烧杯中;
20×SSC或SSPE
30ml
50×Denhardt’s
10ml
10%SDS
5ml
10mg/mlSalmonDNA
1ml
Formamide甲酰***
50ml
dH2O
4ml
,使用µm滤膜滤去杂质后使用;
膜转移缓冲液Western杂交用
组份浓度39mMGlycine,48mMTris,%W/VSDS,20%V/V甲醇
配制量1L
,置于lL烧杯中;
Glycine
Tris
SDS
,充分搅拌溶解;
,加入200ml的甲醇;
;
TBSTBufferWestern杂交膜清洗液
组份浓度20mMTris-HCl,150mMNaCl,%V/VTween20
配制量1L
,置于lL烧杯中;
NaCl
1MTris-HCl
20ml
,充分搅拌溶解;
;
,4℃保存;
封闭缓冲液Western杂交用
组份浓度5%W/V脱脂奶粉/TBSTBuffer
配制量100ml
,充分搅拌溶解;
℃保存待用本封闭液应该现配现用;
五、实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin氨卡青霉素100mg/ml
组份浓度100mg/mlAmpicillin
配制量50ml
;
,充分混合溶解后,定容至50ml;
µm过滤膜过滤除菌;
,-20℃保存;
IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷24mg/ml
组份浓度24mg/mLIPTG
配制量50mL
;
,充分混合溶解后,定容至50ml;
µm过滤膜过滤除菌;
4小份分装1ml,份后,-20℃保存;
X-Gal20mg/ml
组份浓度20mg/mlX-Gal
配制量50ml
-Gal置于50ml离心管中;
***甲酰***,充分混合溶解后,定容至50ml;
,-20℃避光保存;
LB培养基
组份浓度1%W/VTryptone胰蛋白胨,%W/VYeastExtract酵母提取物,1%W/VNaCl
配制量1L
,置于lL烧杯中;
Tryptone
10g
YeastExtract
5g
NaCl
10g
,充分搅拌溶解;
,调节pH值至;
;
5高温高压灭菌后,4;C保存;
LB/Amp培养基
组份浓度
1%W/V
Tryptone
%W/V
YeastExtract
1%W/V
NaCl
mg/ml
Ampicillin
配制量1L
,置于lL烧杯中;
Tryptone
10g
YeastExtract
5g
NaCl
10g
,充分搅拌溶解;
;调节pH值至;
;
,冷却至室温;
;
℃保存;
%W/V
Tryptone
%W/V
YeastExtract
%V/V
Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPOa
TB培养基
组份浓度
配制量
;,;
,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml,高温高压灭菌;
,置于lL烧杯中;
Tryptone
12g
YeastExtract
24g
Glycerol
4m
,充分搅拌溶解;
,高温高压灭菌;
℃以下时,;加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液;
℃保存;
TB/Amp培养基
组份浓度
%W/V
Tryptone
%W/V
YeastExtract
%V/V
Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPO4
mg/ml
Ampicillin
配制量1L
,;
,,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml,高温高压灭菌;
,置于lL烧杯中;
Tryptone
12g
YeastExtract
24g
Glycerol
4ml
,充分搅拌溶解;
,高温高压灭菌;
℃以下时,加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液;
℃保存;
SOB培养基
组份浓度
2%W/V
Tryptone
%W/V
YeastExtract
%W/V
NaCl
KCl
10mM
MgCl2
配制量1L
;
,定容至100ml;
;
在90ml去离子水中溶解19gMgCl2后,定容至100ml,高温高压灭菌;
,置于lL烧杯中;
Tryptone
20g
YeastExtract
5g
NaCl
,充分搅拌溶解;
,加入到烧杯中;
,调节pH值至;
;
,4℃保存;
;
SOC培养基
组份浓度
2%W/V
Tryptone
%W/V
YeastExtract
%W/V
NaCl
KCl
10mM
MgCl2
20mM
Glucose
配制量100mL
;
将18gGlucose溶于90ml去离子水中,充分溶解后定容至100ml;用µm滤膜过滤除菌;
,均匀混合;
℃保存;
2×YT培养基
组份浓度%WVTryptone,1%W/VYeastExtract,%W/VNaCl
配制量1L
,置于lL烧杯中;
Tryptone
16g
YeastExtract
10g
NaCl
5g
,充分搅拌溶解;
,调节pH值至;
;
,4℃保存;
Фb×broth
组份浓度2%W/VTryptone,%W/VYeastExtract,o5%W/VMgSO4·7H2O
配制量1L
,置于lL烧杯中;
Tryptone
20g
YeastExtract
5g
MgSO4·7H2O
5g
,充分搅拌溶解;
;调节pH值至;
;
,4℃保存;
NZCYM培养基
组份浓度
%WV
YeastExtract
%WV
CasaminoAcid酪蛋白氨基酸
1%WV
NZ***
%WV
NaCl
%WV
MgSO4·7HO
配制量1L
;置于lL烧杯中;
YeastExtract
5g
CasaminoAcid
1g
NZ***
10g
NaCl
5g