文档介绍：中国农业科学院学位论文青霉来源的半纤维素酶基因的克隆与表达硕士研究生:蔡红英教师:杨培龙副研究员申请学位类别:理学硕士业:生物化学与分子生物学方向:微生物基因工程养单位:饲料研究所研究生院密级:论文编号:指导专研究培提交日期月
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研究生签名:罄芯论文作者签名:謦独创性声明时间:如..年拢日关于论文使用授权的声明时间:少,,时间:矽耹C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:
\.\砂蝴厮纵厕扒稚饼五中国农业科学院硕士学位论文评阏人、答辩委员会签名表青霉来源的半纤维素酶基因的克隆与表达生物化学微生物基因论文作者蔡红英专业研究方向与分子生物工程杨培龙培养单位芯克饲料研究所位论文题目指导教师硕姓名职称单签名导师评硕导口酶工程博导回硕导囱生物化学与人博导口分子生物学辩微生物工程博导团答委农业微生物资源会议记录厥孟昆论文答辩时间地点年:橇涎芯克セ嵋槭中过程工程研究所中国科学院硕导回研究员硕导团中国农业科学院农业资源员与农业区划研究所教授级王璋高工张伟副研究员邢建民陈茹梅张志芳顾金刚、’
‰及‰值分别为及‰值分别为摘要/。‰。分别为/。以桦木术聚糖为底物,比活,‰痬!,可以产生各种具有优良性状的半纤维素糖苷水解酶,包括木聚糖酶、。本实验以从自云南锡矿的酸性废水蟹掷氲娜株青霉珻虲为实验菌株,以基因克隆与异源表达的方法对其半纤维素酶进行了初步的探索。通过设计简并引物,结合和技术,从青霉,和菌株中分别克隆到个糖苷水解酶的全长基因,包括鯻术聚糖酶基因和,。通过同源比对和序列一致性分析,其推导氨基酸序列与已知序列的最高一致性在ブ洹=岷先峁沟哪D夂痛呋坏愕分析,表明这些基因均具有一定的新颖性。%以上的活性,甚至在℃还能保持%的活性,并在℃条件下保持稳定。表明其在较宽的酸性和中高温范围内具有极好的适应性。以可溶性阿拉伯小麦木聚糖为底物,谋然睿有明显的影响或是对酶有激活作用,该酶能抗胃蛋白酶与胰蛋白酶的水解。在模拟降解麦芽汁的实验中,腦能明显地提高酿酒麦芽的过滤速率并降低粘度.。因此,>呙芏认赴⒔停琈⒔天后表达量达到明显高于目前所报道的火多数事毒厶敲浮炕街杓虻ィ泶锼娇赏ü肿由学或蛋白组学的手段进一步提高,从而在工业应用中有助于节约成本。鲋刈楦事毒厶敲窶蚆淖钍蕄直鹞..钍饰露冉细撸嘉℃。具有极好的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶的能力,℃条件下处理蟮拿富盍κ处理前的—%。在胰蛋白酶处理后,剩余酶活为%。大部分金属离子对这三种酶都有激活作用或不影响酶活力。以角豆胶为底物,和的比活分别为痬4送猓谀D馊斯の敢旱奶跫拢琈谖傅鞍酌复嬖诘奶跫拢苡行У乃饨豆胶,释放出更多的还原糖。综合酶学性质,具有很好的工业应用前景;具有较好的热稳定性,适应性以及在酸性条件下较好的稳定性,且蛋白表达量高,因此在饲料行业应用中更有价值。综上所述,本实验从三株青霉菌株中克隆得到霭胂宋孛富颍⒍云渲械个基因进行了异源表达与酶学性质分析。三个重组酶都偏酸性,并耐受高温,具有良好的金属离子和化学试剂抗性,以及蛋白酶抗性,在应用试验中都具有明显的作用效果。这些优良的酶学性质特性表作用温度为℃,在/痬6嗍鹗衾胱佣訶酶活力没分别为和/./,/,
明它们在食品与饲料行业都有很好的应用前景。关键词:青霉,半纤维素酶,木聚糖酶,桓事毒厶敲福蚩寺。煸幢泶
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目录第一章引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..半纤维素酶