文档介绍：◎厶紊。夕;孥硕士学位论文疭各功能域细胞定位的研究论文题目:驱动蛋白分子单位代码:王东秋细胞生物学分类号:.密级:号:作者姓名导合作导师年学“专业师疉甽
论文作者签名:五百、舞如导师签名:辣长罩壬翻、秘原创性声明关于学位论文使用授权的声明日期:九⋯本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑论文作者签名:日期:乙『『./一,目保存论文和汇编本学位论文。.
中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯.⋯.材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯....⋯..·.·⋯.⋯⋯..⋯方法⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯....⋯.........⋯⋯前言⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯翮舌⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯技术路线⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯.附图⋯..‘⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.·⋯⋯⋯⋯·.致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯..·.结果⋯⋯⋯⋯..··⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯·⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯.·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.发表论文情况⋯.....⋯,...⋯⋯..................⋯⋯.⋯⋯..论文目录论文正文
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驱动蛋白分子各功能域细胞定位的研究中文摘要业:细胞生物学研究生:王东秋导师:朱长军专研究方法:菇ㄇ鞍追肿覭吧图案鞴δ苡马达区、杆状区、尾区和马达区含部分杆状区穆躺ü獾鞍妆泶镏柿研究目的:探讨人驱动蛋白分子的各功能域在真核细胞中的定位。鞍滓吧捅泶镏柿5闹票采用总崛∈约链覯赴谐樘嶙躌,按照逆转录试剂盒说明将孀B汲蒫I杓埔吧蚄舷掠我铮蠵扩增。%琼脂糖凝胶电泳,锎炕约梁写炕疨产物,限制性核酸内切酶和盖校盖衅斡朊盖邢咝曰淼穆躺ü獗泶镏柿进行连接反应,转化感受态细胞大肠杆菌复制菌种秆⊙粜跃渲梁避星嗝顾刂张度为痬腖狟禾迮嘌信嘌梗褂肂提试剂盒提纯质粒。通过酶切,琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定质粒。鞍赘鞴δ苡虮泶镏柿5闹票设计各功能域上下游引物,以构建的野生型蛋白表达质粒为模板,分别┰ü獾鞍妆泶镏柿#转化,筛选阳性克隆培养并质粒小提后,酶切电泳和测序结果鉴定质粒构建成功。赴嘌白H臼笛为检测质粒在真核细胞中的表达,人乳腺癌细胞接种于孔板,每孔个细胞,用含%胎牛血清的一培养基,置于℃,7跸渲培山东人学硕士学位论文
泶锊锏拿庖哂〖ü庀晕⒕迪鹿鄄旄髀躺ü馊诤系鞍椎木咛逖窍赴ㄎ唬养。次日当细胞融合度达%左右时,用H鞠赴孔硼扪G錜嘌照组转等剂量赵靥濉WH~换成含%胎牛血清的培养基,继续培养过夜。质粒转染过夜,刮取细胞,用蛋白质裂解液冰上裂解℃最高速离心后取上清,并使用鞍着ǘ燃觳馐约梁薪械鞍锥考觳猓魅∠嗤鞍琢可样,%聚丙烯酰胺凝胶电泳稳流,掷氲鞍字剩D,,脱脂奶粉封闭,以抗固宸跤备趸锩概剂5腎为二抗,增强化学发光剂从凳夷谙杂啊8菹杂敖峁治龈魈醮肿恿大小,检测各质粒的表达情况。赴榔⒆H炯懊庖哂ü馊旧细胞接种于加飞片的孔板中,每孔个细胞,同上培养并次日做转染。转染过夜后置于荧光显微镜下观察,细胞表达绿色荧光比率达%~%。取出细胞飞片,用冷甲醇/丙酮固定,磷酸盐缓冲液3于含%—洗片危看<尤胧罂刮⒐艿鞍卓固宸跤—洗危看尤氲驴巳购标记羊抗鼠二抗避光孵育。将二抗完全吸出加入一二脒基一槐交胚芄馊旧,用猅洗危看蝜T谠夭F系渭来忝鸺粒ǚ善箍圩由希讣子封片。以上步骤均于室温进行。研究结果:有丝分裂间期,蛋白分子的马达区绿色荧光沿微管分布,尾区在细胞核和微管上均有分布,杆状区则散在分布在胞质中;有丝分裂末期,的马达区仍沿微管分布,