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准确㈡日期:c馊日期纠阵原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。
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高发区食管癌危险因素调查及同卵双胞胎甲基化分析摘要芯勘尘坝肽康硕士研究生:崔娟王立东河南省食管癌重点开放实验室郑州大学基础医学院郑州食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一。河南、河北和山西三省交界的太行山地区是中国,也是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区之一。在世界上食管癌具有显著的地域性分布差异,尤其在中国的高发区更普遍,提示环境因素可能在食管癌的发生中起重要作用。吸烟饮酒等环境因素在西方国家已经证明与%以上食管鳞癌的发生有关,然而在亚洲或中国不同的研究组发现吸烟饮酒与食管鳞癌患病风险的关系很不一致。因此,本研究通过大样本量的流调探讨吸烟饮酒与中国高发区食管癌的风险关系。环境因素引起鹕酥饕5姆肿痈谋洌篋甲基化。强的环境因素能引起甲基化,当环境因素消失或者其它因素的影响,甲基化又可恢复正常,基因的突变、移位或缺失也可引起某些特定部位的甲基化。大量文献报道,抑癌基因的甲基化异常往往为食管癌发生的早期分子事件,可能作为食管癌早期诊断的分子标志物。而且甲基化谕庵苎V薪衔榷ǎ虼送庵苎V屑谆斐5检测具有肿瘤早期诊断的重要价值。大量研究报道,在不同人群的食管癌组织中采用最常见的技术仅检测一个基因或数个基因甲基化的频率。这些技术检测位点有限,很难找到关键的甲基化基因,因此,特异性标志物将来真币用于临床,必须运用高通量的检测技术,搜寻食管癌候选甲基化位点。导
牧嫌敕椒然而,传统的恶性肿瘤标志物的搜寻和鉴定多数是对一定数量的肿瘤患者和正常人进行对比,确定肿瘤标志物。这些人群多为散在的个体,从遗传发育角度讲,在肿瘤发生前,他们之间就有许多差异,这些差异可能大多数纯属个体差异,与肿瘤发生无关;成年后,这些人群不同程度发生肿瘤,期间出现了新的肿瘤相关基因改变,但当此时与正常人比较研究时,这种肿瘤相关的差异基因偈就与遗传发育上的个体差异基因混为一体,给筛查和识别真正的肿瘤甲基化标志物带来极大困扰。如何降低或缩小这种背景差异,是筛查特异性食管癌标志物最具挑战性的问题。本研究一反以往从不同个体搜寻肿瘤标志物的思路,利用独特的同卵双胞胎食管癌患者作为研究对象,对比分析双胞胎成员中一人患病,另一人鲁5姆子差异,确定肿瘤相关甲基化基因。由于同卵双胞胎理论上出生时遗传背景完全相同,这就最大程度减小了个体差异所造成的“噪音”基因,为我们获得食管癌特异性肿瘤标志物提供了独特的途径。我们通过高通量技术来检测同卵双胞胎中食管癌发生的关键甲基化位点,寻找与食管癌发生的候选甲基化基因,为进一步阐明甲基化在食管癌发生中的作用提供理论依据,更为加深对食管癌变分子机制的了解,并为食管癌早期诊断和高危人群预警提供候选指标。研究对象例食管癌患者来自河南、河北和山西三省交界的安阳肿瘤医院、林州肿瘤医院、长治医学院附属和平医院和磁县人民医院等食管癌高发区,主要是年以后确诊的食管癌病人并均经病理证实为食管鳞状细胞癌;对照来自上述医院的门诊和人群普查对象,主要是年以后均经内镜检查排除食管和胃肿瘤的正常人。阅行酝阉òダ醋院幽鲜彻馨└叻⑶5シ⑹彻馨┗颊摺对双胞胎均抽取鼓<笆彻苷衬げ”渚罴熳橹±砑觳槿氛铩问卷调查和家访分别从上述地区收集食管癌病人和鲁6哉占八òサ淖柿先牖Ы屑曳和问卷调查,内容包括:个人基本情况、文化水平、烟酒史、肿瘤家族史、生活摘要
峁崧将所有收集到的临床资料录入恚擞肧统计软件,进行,检习惯和家庭收入等。并进一步从患者就诊医院获得详细临床病理资料。卵型鉴定根据相似度、P秃投檀V馗葱蛄薪屑ā人类甲基化芯片杂交我们利用含有,鯟位点检测酝阉òサシ⑹彻芰圩聪赴〥的甲基化改变。采用试剂盒抽提全血始旌螅獶中未甲基化旱腃转化为痪鼶扩增、酶切、沉淀和悬浮,芯片杂交、洗涤、染色和保护、扫描等步骤。,检验水准岸嘁蛩豯毓榉治&入.,,蕹。.⒏軵的绝对值三辛瞬钜旒谆坏愕纳秆环境因素与