文档介绍：LC-MS/MS 定量分析优化技巧
美国应用生物系统中国公司
应用技术服务部
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样品制备方面:
●样品处理的好坏直接关系到整个LC-MS分析的成败,必须要
有成熟规范的样品制备方法。
●样品预处理各步不能随意省略,如萃取、分离、去盐等。某
些化合物必须化学衍生化以适应LC-MS 要求,如磷酸酯水
解。
●若MS信号实在太低,考虑更换样品处理方法。
●浓度非常低的样品不能保存太长时间,容器吸附、分解等原
因使样品浓度降低,标准品工作液现配现用。
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离子化方法选择:根据样品性质确定离子化方式
适合ESI(IS)的样品类型:
–高极性化合物、蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子;
–胺类、季铵盐等;
–含杂原子化合物如氨基甲酸酯等
适合APCI的样品类型:
–弱极性/中等极性的小分子,如脂肪酸,邻苯二甲酸等
–含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等
ESI不适合的化合物:极端非极性化合物如苯等;
APCI不适合的化合物:非挥发性样品;热稳定性差的样品
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离子化方法选择:
●碱性化合物宜用正离子方式
●酸性化合物宜用负离子方式
●如未知,可能正负都要做
●有些化合物正、负模式都出峰,选择灵敏度高的方式,不明确的
优先试用正离子方式
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LC条件的选择:
●根据化合物类型选择流动相组成,甲醇-水,乙腈-水或甲醇-乙
腈-水
●某些化合物只有某种流动相体系才出峰
●一般正离子方式用甲醇,负离子方式用乙腈好些
●通常有机相比例高些好
●梯度的设定:梯度变化太快对离子化效率影响很大,相应源参
数也应该改变,所以恒定比例流动相能满足分离分析要求时,
尽量不用梯度,尤其定量分析时
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LC条件的选择:
●流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率
●是否加酸不是绝对的,具体应根据LC的分离情况、样品在酸性
条件下的稳定性等决定
●通常pH值低时,[M+H]+比率高; pH值高时,[M+Na] + 、
+ +
[M+K] ,或[M+NH4] 比率高
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LC条件的选择
+ +
●定性分析时,有时加一些NH4 ,Li 等,可帮助确定判断母离
子,对碎片较少的化合物,可以增加其质谱特征性,但会使生
物大分子的质谱复杂化。
●水的选择:娃哈哈纯净水比普通蒸馏水好,若在玻璃瓶中已存
放时间太长,有可能变质。当本底增大,LC压力增高,应更换
水相。
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LC条件的选择
●溶解样品的溶剂:用流动相或甲醇、乙腈溶比用含水多的溶剂
LC峰系形好。如果常用的流动相不能很好溶解样品,可用少
量特殊溶剂先将样品溶解后再用流动相稀释。
● LC流量在色谱柱和MS允许情况下适当高可以压缩峰宽,使峰
强度提高。
●当只有粗色谱柱,只能大流量时可采用三通分流,以适应MS
的流量要求。
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