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帕金森病’琍是常见的神经系统退行性疾病,其基本的临床症状包括静止性震颤、僵硬、运动迟缓和姿势异常等。由于是一种逐渐进展的变性疾病,常导致多种运动障碍,且患病人数逐年增加,因此对社会和经济影响已经越来越大。其主要病理变化是黑质多巴胺珼能神经元的变性,,含量明显减少。目前治疗的主要方法有药物治疗、手术治疗、细胞移植和基因治疗。药物和手术治疗对起到缓解症状的作用,不能延缓或阻止疾病进程。细胞移植治疗通过移植细胞替代损失的能神经元以恢复黑质多巴胺的神经传递,虽有效果但不持久。目前认为:理想的治疗方法应该不仅能纠正脑内含量的不足,而且能保护残留的能神经元,基因治疗是实现这一目标的最佳途径之一,己成为治疗的研究热点。基因治疗通过把目的基因转染到细胞内再进行脑内移植或者通过质粒或病毒载体直接把目的基因转染到脑内病变部位。骨髓间充质干细胞珺蚶丛捶岣唬〔募虮悖谔逋庖子谂嘌屠增,且自体移植克服了免疫排斥和伦理道德等特点,而成为理想的载体细胞。常用的外源基因主要包括促进合成的酶类如酪氨酸羟化酶琓、各种神经营养因子基因及抗凋亡基因等。其中是合成过程中的限速酶,是神经系统内能神经元的蛋白标志。研究发现把外源性的,甦
第一部分大鼠骨髓问充质干细胞的体外培养及生物学鉴定方法:基因导入模型大鼠纹状体内,可增加脑内的水平,改善阿扑吗啡,诱导的旋转症状,对有治疗作用。在结构和功能上与胶质细胞源性神经营养因子,泄兀咄粲贕羌易澹訢苌经元具有特异性的营养、支持、保护和损伤修复作用。研究证实谔迥谕都能促进胚胎中脑神经元的存活,阻止神经退行性病变的发生,是治疗的一种有效的神经保护因子。研究发现将或蛐奘蔚南赴直鹨浦仓罥笫竽阅冢苊飨愿善大鼠的行为、提高纹状体内含量。但进一步研究发现单基因不足以维持水平及症状的持续改善,目前研究趋向于多基因共转染的治疗方法;研究发现与单转染组相比,将与枷阕灏被嵬阳让福珼铣晒讨幸种重要的酶沧H綪笫笪谱刺搴笮形QЦ谋浣厦飨裕也灰览低庠葱运那忄呤プH綯橹挥性谕庠葱运那忄┻存在时才可检测到。本研究将和岷掀鹄唇谢蛑瘟疲柘氪朔椒ḿ瓤稍黾幽阅贒暮铣桑同时又能保护能神经元,二者协同作用以达到双重治疗效果。而目前将和ɑ蚬沧H綛脑内移植治疗的研究国内外尚未见报道。本研究首先利用密度梯度离心法对刑逋夥掷搿⑴嘌肜┰觯究其生物学特性、增殖情况以及相关特异性抗原的表达,以证实所培养的细胞为核婧罄煤辛礁龆嗫寺∥坏鉷质粒,将和虼起来的,构建和ɑ虮泶镌靥宀⒆H镜紹中,获得稳定携带甌甆的⒉舛═瓸中和和蛋白的表达;,观察对模型大鼠的治疗作用,并通过多种手段对移植前后大鼠行为学、特异性神经递质、组织学以及相关基因与蛋白进行比较分析,为的基因治疗探索一种新的有效的方法。本研究分为以下三个部分:蘧跫禄袢〈笫蠊撬瑁芏忍荻壤胄姆ǚ掷隑,进行原代培养。瓸传代培养,采用ú舛ㄆ渖せ钚浴摘要
第二部分双基因表达载体的构建及体外表达结果:第三部分基因修饰的骨髓间充质干细胞对帕金森病模型大鼠的治疗作用方法:昧魇较赴际鹾兔庖呦赴旧ú舛–虲肿拥谋泶铩又趾内,体积较大的圆型细胞开始贴壁生长:笙赴蟛糠贴壁,开始大量伸展:数天后,细胞增殖旺盛,从形态学上判断为ù笙赴ぱ杆伲せ钚圆舛ń峁允舅孀排嘌奔涞耐埔疲光度值逐渐增加,在培养第保赴鲋匙钗Q杆佟魇郊觳釩粜月式鑫.%,而阳性率高达.%,免疫细胞化学检测呈阳性,呈阴性表达,利用排除法确定培养细胞为胮和甆质粒获取和颍菇甌甆载体,并进行酶切及基因测序鉴定。弥侍玴..靥遄H镜紹中,并利用进行筛选。肦际跫觳釺瓸中和的表达。妹噶C庖呶椒ú舛ㄗH、及螅琓瓸中和鞍椎谋泶铩盖屑盎虿庑蚪峁砻鞒晒菇╬..靥濉H炯癎秆『螅竦梦榷ㄐ鴓..腂。;捎昧降阕⑸浞ǎ笫笥也嗪谥首⑸.羟基多巴胺致单侧损毁,制备动物模型,大鼠随机分为对照组和模型组。摘要.
结果:鹾、、大鼠腹腔注射/,对模型大鼠进行行为学测试。.,,移植憾砸浦蚕赴一溴脱氧尿嘧啶标记。浦、、后对各组大鼠注射⒓锹内旋转圈数。