文档介绍：⋯一一尹守亮谨以此论文献给我敬爱的导师——于文功教授●,,
一、爱黼/叮ひ帕取■弋炉∥吝,。学位论文完成日期:指导教师签字:答辩委员会成员签字:\弘,,、
导师签字:学位论文作者签名:尹奇轰/签字日期:甜陖月巧召签字日期:》··/年本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,并同意以下事⒀S腥ūA舨⑾蚬矣泄夭棵呕蚧顾徒宦畚牡母从〖痛排蹋市砺畚⒀?梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥菘饨屑焖鳎梢圆捎影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊馀贪电子杂志社”用于出版和编入《中国知识资源总库》,授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。C艿难位论文在解密后适用本授权书项:被查阅和借阅。
,本研究首赖于细菌群体感应系统的调节和控制,实验证明群体感应系统突变或缺陷的病原菌致病能力显著下降,群体感应抑制因子与传统抗生素的作用机制不同,它不干扰细菌的正常生长,而是直接抑制病原菌的毒力因子的生成,因此,理论上能够缓解细菌耐药性的产生。本研究主要目的是从海洋微生物的次级代谢产物中筛选群体感应抑制因子。本文利用铜绿假单胞菌禾甯杏ι秆∧P蚉妥仙ǜ司群体感应指示菌株对海洋微生物发酵粗提物进行活性测试,萌禾甯杏Φ骺基因启动子和缺失启动子的蔗糖致死基因构建而成,外源加入信号分子和蔗糖能够诱导表达杀死细菌,若存在抑制因子致死作用将会得到补救;信号号分子能够诱导仙ň兀粲腥禾甯杏σ种埔蜃哟嬖冢仙菌素产量将会降低。经筛选发现攴畔呔株真菌粗提物具有群体感应系统抑制活性,其中菌株种苹钚宰钋浚序列与数据库比对,发现该菌株与斜卧青霉嗬胱罱嗨菩最高。目前,还没有报道该类青霉种属具有群体感应抑制活性。对菌株进行发酵培养,在其发酵培养液中分离得到活性单体化合物觯煤舜次证明该吡喃酮类化合物具有抑制铜绿假单胞菌和紫色杆菌群体感应系统的活性。在不影响细菌生长的浓度范围内,该化合物能显著降低铜绿假单胞菌和紫色杆菌群体感应调控的毒力因子,如弹性蛋白酶的活性、绿脓菌素产量,紫色菌素产量,抑制生物被膜的形成;—际踔っ鞲没衔锬芟灾档蚎骺叵薈
关基因的表达水平。革兰氏阴性菌群体感应信号分子在化学结构上具有一定的相似性,主要差别在于内酯环上的脂肪酸碳链ざ群捅ズ投龋菡庵窒嗨菩院筒畋穑颐对海洋化合物库中的化合物进行比较,利用筛选模型对个与信号分子结构相似的化合物进行群体感应抑制活性测试,发现龌衔锞哂腥禾甯杏σ种苹性,,该化合物已有报道具有铜绿假单胞菌群体感应抑制活性。,在非抑菌浓度范围内,.能够降低铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的活性,绿脓菌素的产量,抑制紫色杆菌紫色菌素的生成,抑制铜绿假单胞菌运动性,验证该化合物能够降低群体感应调控相关基因的表达。本研究所发现的群体感应抑制因子与传统抗生素类药物作用机理不同,只抑制病原菌群体感应调控的毒力因子,但不会对细菌的正常生长产生选择性压力,理论上能够降低细菌耐药性产生的概率。因此,本研究是一项具有重要理论指导意义的基础研究,为解决细菌耐药性问题提供了新思路,为海洋活性物质的研究与开发引入了新的理念和方法。关键词:细菌耐药性;群体感应;海洋微生物;群体感应抑制因子活性评价;新型抗菌药物
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