文档介绍：:.一一
’
学位论文作者:彳泰鹈学位论文作者:彳:蔽鹱原创性声明学位论文使用授权声明日期:为辍拢疍日日期:知年翴。日本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。
、‘
摘要恶性肿瘤是当今社会威胁人类健康的主要疾病,肿瘤基因治疗的迅速发展为攻克这类严重威胁人类生命健康的疾病带来新的希望。基因转运系统是基因治疗过程中的关键环节,在肿瘤的基因治疗研究中,腺病毒载体目前应用最多的一种病毒载体。研究表明,外源基因的高表达使得宿主细胞的免疫反应增加,从而限制了腺病毒载体的功效。所以靶向感染肿瘤细胞的重组腺病毒逐渐成为关注的热点。靶向转运是攻克这些问题的一种重要策略,即在靶细胞中运用肿瘤特异性启动子有选择地表达特异性基因。然而,一些具有高特异性和选择性表达活性的启动子在克隆到腺病毒载体之后会被改变甚至缺失。对于这种现象,一种比较合理的解释是腺病毒基因序列中,目的基因的附近存在着增强子或潜在的转录起始位点,它们与启动子相互作用从而导致“非特异性”转录。目前报导的拖俨《净蜃橹泻性銮孔拥脑<蟹聪蚰┒酥馗葱蛄琁珽虴舳樱琾启动子和銮孔拥取型腺病毒基因组左侧含有两个增强子元件,一个是重复序列,特异性调节在细胞中的转录,另一个在重复序列即左侧洌呈降鹘谒性缙诨的转录,因此对下游基因的表达有着显著影响。目的:构建一系列含ǜ婊虻南俨《驹靥澹ü溆ü獗泶锓治隼研究腺病毒载体左侧韵掠位虮泶锾匾煨缘挠跋臁方法:采用一系列分子生物学方法及际踔刈橄俨《驹靥遄蟛郔区下游构建正反两个方向含有人端粒酶逆转录酶舳印启动子及ǜ婊虻闹刈橄俨《驹靥濉V刈橄俨《局柿>璓咝曰笥弥体转染法转染细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒,测得滴度后分别以相同的腥静煌南赴鄄煊ü獗泶锴榭觥结果:成功构建了、和五种重组腺病毒表达载体,并利用包装系统制备了这五种高滴度的重组腺病毒。重组腺病毒分别感染细胞、人鼻咽癌细胞⑷斯侨饬鱿赴、人乳腺癌细胞、人胰腺癌细胞赴⑾衷赴赴俨《镜脑鲋承式细撸ü獗泶锝锨俊摘要
将各病毒在各细胞中的荧光表达量进行分组。在各细胞中分别以和为一组,蛂R蛔椤7⑾郑诟飨赴校髯樽芴寮均有差异。经统计学分析,各组内荧光表达量不存在显著差异。无启动子的重组腺病毒在腺病毒增殖比较强的细胞中有微弱荧光表达。结论:重组腺病毒左侧哂性銮孔庸δ埽跋焐舷掠翁匾炱舳蛹捌涞控基因表达的特异性,但对上下游基因的影响程度无明显差异。重组腺病毒左侧哂欣嗥舳庸δ埽傻骺厣舷掠位虻谋泶铮影响其表达效率。关键词。腺病毒;左侧宦躺ü獾鞍摘要
‘痶,—■
.%.,、琔瑃.:篈籐籊
目录图和附表清单⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第乱浴第孪俨《驹靥宓墓菇ā摘蓿甀目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..肿瘤的基因治疗⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。腺病毒介导的靶向性肿瘤基因治疗⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯舳釉谥琢霭邢蛐曰蛑械挠τ谩报告基因的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯研究方案和技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯......................................................................................................俨《《驹靥宓姆⒄埂研究方案⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.<.。
第轮刈橄俨《景凹肮δ懿舛ā实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.实验