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摘要本论文研究内容分为两个部分。第一部分:药物成瘾性是由于长期药物滥用导致的一种复杂的大脑疾病,现已成为全世界关心的社会和医学问题,其主要特征是一旦成瘾,将经久不衰,很难消失。关于药物的精神依赖至今尚无理想的根治方法,本研究根据即刻早期基因琲胍┪┪锍神作用的影响,进而寻求解决药物精神依赖的有效基因疗法。本实验主要采用技术,应用酆厦窱中的启动子成功构建了靶向甪与基因的体外转录质粒瓽畇,瓽畇以及阴性对照载体瓽2捎肊H臼约练ńǜ髦刈楦扇胖柿K彩弊H局细胞,考察细胞接种数目,细胞融合度,疨及血清等因素优化得到最佳瞬时转染效率为%左右。,通过实验检测甪与基因的表达情况;同时我们对转染单基因沉默载体的细胞在抗性筛选压力下进行稳定筛选,左右得到稳定表达细胞株,对其进行了实验。结果表明,与阴性对照组相比,瞬时转染细胞中甪与的相对表达量与无干扰质粒瓽槲廾飨圆畋稹N榷ū泶镏刈橹柿..琾—.腜细胞中甪与的相对表达量分别为%和.%。本研究通过基因重组技术,分别成功构建了靶向雑载体并成功筛选出不同干扰质粒的抗性克隆;通过技术,检测出上述干扰序列可以有效地抑制细胞甪与的表达,为进一步在整体水平中研究甪及基因的功能提供了新的研究方法,在某种程度上为药物成瘾的分子机制研究提供了一个较好的体外细胞模型。第二部分:肿瘤的发病机制涉及到多个信号通路,它们相互联系、相互作用,组成一个分子网络体系,因此针对单个靶点进行抗肿瘤治疗很有可能收效甚微。为了说明肿瘤多靶点治疗的重要意义,.,觳庀赴鲋骋种坡剩峁允舅ɑ騌载体畇甌蚿..对肝癌细胞的抑制率均可达到%左右。..以及在单基因中筛选出抑制基因表达效果最好的槌傻乃ɑ载体瓽甌直鹱H維赴后检测到细胞中的摘要
相对表达量分别为,,;的相对表达量分别为,.。肿瘤的发病是一个复杂的分子网络疾病,为了进一步揭示肿瘤发病机制中各基因间的相互关联,,结果显示及的表达与阴性对照载体薏畋稹S捎谥琢龅亩喟械阒瘟剖由不同信号通路调节的病变细胞,所以关于肿瘤治疗的多靶点的选择以及明确与肿瘤相关基因间的联系有待进一步研究。关键词:药物成瘾;;猣;摘要
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实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..!⒕⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.;南拗菩阅谇忻赶衬┒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..、复苏与冻存⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。.细胞计数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..细胞转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..
邢騝与诙糠炙ɑ騌靥宓幕钚约ā驛的退火⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.载体的构建与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..实验材料与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.实验讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯...⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..成瘾的分子机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.—细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..