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clinicallaboratorymedicine
血液三大尿液常粪便规体液
脱落细胞学血型与血库
临床检验医学的定义及争辩范围临床检验医学的进展史及现状临床检验根底教学的目的
学好临床检验根底的要求临床检验根底的进展史
①古代最早是检测尿液开头的。
②17世纪的显微镜的制造推动了临床检验的进展。AntonyvanLeeuwenhoek
③上世纪50年月,库尔特〔Coulter〕电阻抗原理的提出,使临床检验从手工步入自动化、电脑化,使得检验变得简便、快速、周密度高更。
⑤目前,试剂更加批量化、配套化、专业化和多样化
⑥检验液更加重视检验方法的标准化和质量把握,实施全面的质量把握和质量治理。
⑦试剂和仪器的更使得检验更便捷:如床边检测(pointofcaretest,POCT〕,使检测标本更颖、穿插污染率低、更接近病人的生理和病理状况。
临床检验根底的现状〔二〕:实施与保证全面质量治理
分析前:生理变化、饮食因素、药物因素、标本采集与保存等。
分析中:检测方法、仪器设备性能与质量、试剂质量等。
分析后:发报告的把关。复核其信息内容如姓名、性别、年龄、住院号、与疾病符合度等。临床检验的特点:
绪论
临床检验医学的定义及争辩范围临床检验医学的进展史及现状临床检验根底教学的目的
学好临床检验根底的要求临检的根底教学目的:
:
把握:皮肤采血方法,Hb成分、种类及测定临床意义。
生疏:血液的组成、理化性质和功能,Hb的构造,参考范围。
第一章chapter1血液标本采集和血涂片制备bloodcollectionandbloodsmearpreparation
血液组成
离心后(写)
血液主要理化性质
①颜色:动脉血——鲜红色静脉血——暗红色血浆——浅黄色高脂膳食——乳白色
溶血——血浆呈不同程度红色
②量:***约占体重的7%~9%,平均血量5L左右。
③pH:~
④比密:~
⑤渗透压:290~310mosm/Kg·H2O第一节血液标本采集bloodcollection
血液标本的采集是分析前质量把握的重要环节一、标本采集的一般要求
检验申请单:患者、临床信息完整
标本采集和处理具体要求:标本种类标识、采集时间、急诊和危重患者信息、
标本信息完整性:标本的防腐、保温等。
标本拒收:依据标本接收的文件不符合者。二、血液标本类型
全血(wholeblood):静脉、动脉、毛细血管
血浆(Plasma):全血参加抗凝剂离心后的上清液。
血清(serum):血液凝固后离心所得上清液。
分别或浓缩的血细胞成分:如血小板、白细胞、单个核细胞等。
三、血液标本采集方法〔一〕皮肤采血〔二〕静脉采血〔三〕动脉采血
〔一〕皮肤采血法
适用于血量<
计数、WBC计数、Plt计数、Hb、ESR微量法等的测定等。
器材:采血针专用的“采血针”或三棱针,用前应高压灭菌,一人一针。专用采血针三棱针
采血部位
手指采血:
WHO推举实行外周血以左手无名指或中指指采血部位尖内侧优点:便利、获较多血量结果比较恒定
缺点:与静脉血仍存在某些差异。
耳垂采血:
优点:痛感轻、便利、适用于反复采集
缺点:血循环差受气温影响大、检查结果不恒定、RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高,特别是冬季。
其他
拇指、拇趾或足跟采血——半岁以下婴幼儿皮肤完整处——严峻烧伤者
采血操作
1、预备:2、采血部位按摩:3、消毒皮肤:4、针刺:5、擦去第一滴血后吸血:6、压住伤口片刻:
留意事项
〔1〕采血部位皮肤完整。〔2〕无菌技术操作:防采血部位感染,一人一针。
采血针刺入皮肤应深浅适中。
多项检查时,采血次序为:Plt计数→RBC计数、Hb→WBC计数与分类。
取血用于自动化血细胞,要防止棉球纤维混入堵塞仪器。其次章chapter2血液一般检验bloodgeneralexamination
第一节红细胞检查
Redbloodcell(erythrocyte)examination
红细胞检查内容:
RBC是血液中最多的一种血细胞,其检查包括红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观看、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。
形态:无核,双凹圆盘形不染色:呈草黄色
RBC的生成及破坏:〔见PPT〕
早幼红细胞中幼红细胞干细胞原始红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞一、红细胞计数〔redbloodcellcount〕
【原理〔principle〕】
血液用等渗稀释液稀释肯定倍数→滴入血细胞计数盘→显微镜下计数肯定范围内的RBC数→换算得每升血液中的RBC数。
【参考范围〔range〕】
成年女性:〔~〕×1012/L成年男性:〔~〕×1012/L生儿:〔~〕×1012/L婴儿:〔~〕×1012/L
儿童:〔~〕×1012/L
【临床意义〔clinicalmeaning〕】一、生理性变化
(一)生理性增多
机体缺氧而使RBC代偿性↑:生儿、高原生活、猛烈的体力劳动
成年男性比女性高:男性在6~7岁时最低,25~30岁时达顶峰。女性21~35岁维持最低水平。
其他:抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等(二)生理性削减
生长发育造血原料相对缺乏:从6个月至2岁婴幼儿
造血功能减退:局部老年人生理性贫血
血容量增加:妊娠中晚期二、病理性变化
(一)病理性增多
相对增多:血液浓缩
确定性增多:①继发性增多:如心肺疾病②原发性增多:×1012/L应实行治疗措施
(二)病理性削减
RBC生成削减:※骨髓功能衰竭:AA※造血物质缺乏或利用障碍:IDA、MA
RBC破坏过多:※内在缺陷※外在特别
RBC丧失过多:×1012/L应考虑输血二、血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement
(一)Hb分子构造及成分:
血红蛋白(hemoglobin,Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质,由珠蛋白和亚铁血红素组成。
;。
其它:
①复原Hb:Fe2+
②氧合Hb:与O2结合的Hb
③Hb衍生物:HbCO、SHb
④高铁Hb:Fe3+
2023年6月17日59P24
(二)Hb的测定:
ICSH(Internationalcouncilforstandardizationhaematology)推举***化高铁血红蛋白测定法
〔HiCN〕
:Hb是色素蛋白,在血液中以多种形式存在,利用高铁***化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白〔Hi〕,Hi可与CNˉ结合成***化高铁血红蛋白,在540nm处有一吸取峰,用分光光度计测定其吸光度,换算成每升血液中血红蛋白的含量。
方法学评价
***化高铁血红蛋白测定法
优点:①操作简洁、显色稳定,便于推广。
②转化液较稳定,易保存。
③除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。
④HiCN参考品可长期保存,便于质控。缺点:①KCN剧毒,易污染环境。
②不能测SHb,HbCO转化慢。
③浊度高引起Hb浓度假性增高:高球蛋白血症,脂血,试剂混浊,WBC和Plt高。
十二烷基硫酸钠血红蛋白〔SDS-Hb〕测定法
SDS能破坏WBC,摩尔消光系数未定。
碱羟血红蛋白测定法:
HbF不能转化,最大吸取峰在575nm。
叠氮高铁Hb测定法:
具有与HiCN法相像的优点,但仍存在试剂污染。
溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法:不破坏WBC,周密度、准确性略低。
2023年6月17日65P25
生儿:170~200g/L女:110~150g/L男:120~160g/L
70岁以上老年人:男:94~122g/L女:87~112g/L
质量把握〔1〕血清浊度:〔2〕器材及试剂质量:〔3〕技术与操作:〔4〕废弃物的处理:临床意义与RBC计数相像
鉴别贫血类型:
IDA:RBC↓Hb↓↓MA:RBC↓↓Hb↓
影响检验结果的因素:血液总容量转变全身血浆容量转变教学目标:
把握:血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义;网织红细胞的形态、计数
方法及测定的临床意义。
生疏:血涂片制备与染色、红细胞的形态学转变。了解:Hb测定的方法学评价。
血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子构造及成分:
血红蛋白(hemoglobin,Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质,由珠蛋白和亚铁血红素组成。
第三节血涂片制备与染色preparationandstainingofbloodsmears
血涂片的制备
〔一〕载玻片和推片:载玻片推片
载玻片:清洁、枯燥、中性、无油腻。推片:边缘光滑。
〔二〕血涂片制作:良好血涂片:
①血膜至少长25mm。
②边缘整齐,两侧、两端留有空隙。
③头体尾清楚:细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。
④血膜末端无粒状、画线或裂隙。
(三)制备血涂片的影响因素
推制适当的血膜角度大,速度快→太厚,太短推片边缘不光整→刷尖用力不均→厚薄不匀血量过多、血液粘度高→无尾载玻片有油腻血涂片染色
染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。
1..瑞氏染色法是血液染色最经典和最常用的染色法。
吉姆萨染色法
瑞氏吉姆萨复合染色法
细胞活体染色法
巴氏染色法
苏木素-伊红染色法
〔一〕瑞氏染色法〔WrightStain〕
:
⑴美蓝〔又称亚甲蓝,methyleneblue,M+〕
通常为***盐,***化美蓝(MCl),阳离子,一种碱性染料。
⑵伊红〔eosinEˉ〕:
通常为钠盐(NaE),阴离子,一种酸性染料。
⑶Wright染料
MCl+NaEME+NaCl
⑷甲醇〔溶剂、固定剂〕:
①MEM++Eˉ
②具有强大的脱水力。
可将细胞固定为肯定形态;使蛋白沉淀为颗粒状、网状等构造;增加染色效果;染色原理:物理的吸附作用和化学的亲和作用
正常状况染色结果:外观:淡紫红色
镜下:①RBC呈粉红色,略有碟状感。
②WBC浆中颗粒清楚,并显示各种细胞特有的颜色。
③细胞核染紫红色,核染色质构造清楚。
RBC嗜碱性颗粒中性颗粒嗜酸性颗粒
PH对细胞染色的影响:
PH↓→正电荷增多→易与伊红结合→染色偏红
PH↑→负电荷增多→易与美蓝结合→偏蓝染色的质量保证
染液质量
染色时间与染液浓度染色过程
染液的冲洗脱色与复染
方法学评价:瑞氏染色法:
优点:对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果,缺点:对细胞核的染色不如吉姆萨染色
吉姆萨染色:
原理:同瑞氏染色。
优点:本法对细胞核染色较好,构造更清楚。缺点:胞质和中性颗粒染色较差。
瑞-吉复合染色:取长补短。
其次章chapter2血液一般检查bloodgeneralexamination
第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion红细胞形态检查Redblloodcellllmorphollogyexamiinatiion正常红细胞形态
正常色素性normochromatic特别红细胞形态红细胞大小特别红细胞形态特别
红细胞血红蛋白含量特别
红细胞构造及排列特别
RBC大小特别
小RBC大RBC巨红细胞RBC大小不均d<6umd>10umd>:
球形RBC椭圆形RBC靶形RBC口形RBC镰形RBC
正常色素性normochromatic
低色素性高色素性嗜多***hypochromaticHyperchromaticpolychromaticRBC中消灭特别构造:
嗜碱点彩RBC染色质小体basophilicstipplingcellHowell-Jolly’sbody有核RBC疟原虫
卡波环
cabotringnucleatederythrocyteplasmodium六、
介于晚幼红和成熟红细胞之间未完全成熟的RBC。胞质内含尚存留多少不等的嗜碱性物
质RNA,经活体染色后,嗜碱性物质分散成颗粒,其颗粒又可联缀成线而构成网状。原红早幼红中幼红晚幼红网织红RBC
分级:
型 丝球型:仅存于骨髓
型 网型
型 破网型:外周血少量IV型 点粒型:
显微镜计数法
【原理】
阳离子染料进展活体染色,在显微镜下计数。
【试剂】
①亚甲蓝N溶液:
②煌焦油蓝溶液:
【参考值】***:~〔25~75〕×109/L生儿:~
【方法〔method〕和质量把握】
1混匀
制成薄血涂片
染液颖2d血液2d染15~20min
数1000Ret确定值个RBC中计算
出分数=Ret分数×RBC/L
的Ret
Ret计数仪法
血液计数法
流式细胞仪计数法
Ret增高:表示BM红系生成旺盛
①溶血性贫血:,急性失血后5-10天Ret达顶峰,2周后恢复正常。
②放、化疗后,造血恢复时:Ret可短暂而快速增高。
③Ret可作为贫血治疗疗效观看指标:
※抗贫血药物治疗后1-2天开头高,1周左右达顶峰,贫血愈严峻,Ret上升超高,且
Ret先于RBC和Hb增高。
※抗贫血药物治疗后,Ret不上升,说明治疗无效或骨髓造血功能有障碍。
④骨髓移植后监测造血功能受抑或恢复:移植后21天,如>15×109/L,表示无移植并发症。如<15×109/L,且Plt、WBC增高,可能移植失败。
Ret削减:
表示骨髓造血机能减弱。
常见再生障碍性贫血:Ret<
确定值<15×109/L,为其诊断标准之一。
※把握内容:静脉采血的部位、抗凝剂的使用范围、
HCT定义、临床意义,ESR定义、影响因素、临床意义,红细胞三个平均指数的计算及意义。
※生疏内容:静脉采血,抗凝剂,ESR、HCT测定的方法,参考值。
※了解内容:采血操作对检验结果的影响,血液标本运送、保存与处理。静脉采血法Veinpunctureforbloodcollection
凡需血量较多的检查>
如:ESR、Hct、凝血因子的测定等。
一般静脉采血法
真空采血法
[预备器材]
[部位]体表浅静脉
常用:肘部静脉幼儿可用:颈外静脉
[采血操作和留意事项]
真空采血法(负压采血法)
主要原理是将有胶塞头盖的采血管抽成不同的真空度,利用针头、试管和针筒组合成全封闭的真空采血系统,实现自动定量采血。
[主要器材]
①双向采血针
②真空采血管穿刺针刺塞针
[主要器材]双向采血针、真空采血管
[真空采血法的优点]①计量准确②传送便利③封闭无菌④标识醒目⑤刻度清楚⑥简洁保存等。
[采血方法]
※硬接式双向采血针的采血操作
※软接式双向采血针的采血操作穿刺针刺塞针
四、血液标本抗凝bloodspecimensanticoagulation
抗凝:用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻挡血液凝固。抗凝剂:能够阻挡血液凝固的物质。
乙二***四乙酸〔EDTA〕盐〔ethylenediaminetetraceticacid〕
①原理:与血钙离子形成螯合物。
②用量:15g/:5ml血液
③适用于:血常规检查、Hct、Plt计数
④不适用于:凝血象检查和血小板功能试验
枸橼酸钠〔trisodiumcitrate〕
①原理:与血中钙离子形成可溶性螯合物
②用法:109mmol/L与血1:9或1:4
③适用于:血栓与止血检验、ESR、输血保养液。
④不适用于:血细胞计数,Hct(不能枯燥)〔heparin〕:
①原理:加强AT-III灭活丝氨酸蛋白酶,从而具有阻挡凝血酶形成
②用量:1g/L水溶液,。
③适用于:RBC脆性试验、Hct及细胞培育等。
④不适用于:WBC和Plt计数、血涂片检查、凝血象检验。〔oxalate〕:
①原理:草酸根与血液中钙离子生成草酸钙沉淀。
②用法::9
③适用于:制备正吸浆。
④不适用于:对凝血因子V保护功能差,影响PT测定;沉淀物影响自动凝血仪的使用。第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion
四、红细胞比容测定
红细胞比容〔hematocrit,Hct或packedcellvolume,PCV〕是指在肯定体积全血中RBC
所占容积的相比照例,与RBC数量和平均体积有关。
〔一〕检测方法
离心沉淀法:温氏法、微量血细胞比容法
血液法:
〔二〕温氏法的试剂、器材和质量把握长毛细滴管温氏管
血浆层
白色乳糜层灰红色层暗红色层
含复原HbHct
含氧RBC层
(三〕方法学评价]
〔四〕参考值
男:~ 女:~
〔五〕临床意义
HCT降低:①各种贫血②稀释血症
HCT增高:①血浆丧失②RBC量增加
临床补液量的参考:
用于计算MCV和MCHC
五、红细胞平均指数
平均红细胞容积:(meancorpuscularvolume,MCV)RBC群体中各个RBC体积的平均值。MCV =×10〔fL〕1fL=10ˉLRBC/L
平均红细胞血红蛋白含量:〔meancorpuscularhemoglobinMCH)RBC群体中各个RBC血红蛋白含量的平均值。Hb(g/L)
MCH=RBC/L×10pg1pg=10g
平均红细胞血红蛋白浓度:(meancorpuscularhemoglobinconcentrationMCHC)
平均每升RBC中含有的Hb浓度Hb(g/L)MCHC=Hct
参考值:
MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L)
***80-100 26-34 320-3601~3岁79-104 25-32 280-350生儿86-120 27-36 250-3702023-6-
贫血的形态学分类MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L) 病因
正常细胞性贫血80-100 27-34 320-360 急HA、AA
单纯小细胞性贫血<80
<27
320-360
慢性炎症
小细胞低色素性贫血<80
<27
<320
IDA
大细胞性贫血>100>34320-360 MA
八、红细胞沉降率测定erythrocytesedimentationrateESR
〔一〕定义:指在肯定条件下,离体抗全血中的RBC自然下沉的速率。
〔二〕魏氏法的试剂、器材和质量把握
三、ESR影响因素
血浆或RBC本身发生转变则使血沉发生变化。:
纤维蛋白原
球蛋白增高↑ESR加快
+-
胆固醇白蛋白↓
—糖蛋白ESR减慢卵磷脂
红细胞因素:
①RBC数量②RBC形态ESR快
正常数量数量削减
ESR慢
抗凝剂影响试验温度血沉测定值校正值
温度的影响温度上升,ESR增快
血沉管因素:血沉管倾斜30,血沉加快30%
(四)参考值
<50岁男:0~15mm/h女:0~20mm/h
〔五〕方法学评价
(六)临床意义:
对疾病的鉴别和动态观看具有肯定的参考价值
生理性增快: