文档介绍：(1)溶质和溶剂的性质
碘在四***化碳溶液中呈紫色,在乙醇中呈棕色,在四***化碳溶液中即使含有体积分数为1%的乙醇也会使碘溶液的吸收曲线形状发生变化。溶液的折光指数(n)随溶液浓度的改变而变化,并对吸光度有影响。,n基本上是一常数,这也说明朗伯-比尔定律只有在低浓度时应用者正确的。
(2)介质不均匀性
朗伯-比尔定律是适用于均匀、非散射的溶液的一般规律,如果被测试液是胶体溶液、乳浊液或浊液,则入射光通过溶液后,除了一部分被试液吸收,还会有反射、散射使光损失,导致透光率减小,吸光度异常增大,造成对朗伯-比尔定律的偏离。
(3)溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化
离解是偏离朗伯-比尔定律的主要化学因素,溶液浓度的改变,离解程度也会发生变化,吸光度与浓度的比例关系便发生变化,导致偏离朗伯-比尔定律。溶液中有色质点的聚合与缔合,形成新的化合物或互变异构等化学变化以及某些有色物质在光照下的化学分解、自身的氧化还原、干扰离子和显色剂的作用等,都对遵守朗伯-比尔定律产生不良影响。
提高吸光光度法灵敏度和选择性的途径。
示差吸光光度法
示差吸光光度法是用—已知浓度的标准显色溶液与未知试样的溶液相比较,测量吸光度,从测得的吸光度求未知浓度。
按所选择测量条件不同,示差吸光光度法有三种操作方法:
(1)高吸光度法
光电检测器未受光时,其透光度为零,光通过一个比试样溶液稍稀的参比溶液后照到光电检测器上,调其透光度(T)为100%,然后测定试样溶液的吸光度。此法适用于高含量测定。
(2)低吸光度法
先用空白溶液将透光度调整至100%,然后用一个比试样溶液稍浓的参比溶液,调节透光度为零,再测定试样溶液的吸光度,此法适用于痕量物质的测定。
(3)双参比法
选择两个组分相同而浓度不同的溶液作参比溶液(试样溶液浓度应介于两溶液浓度之间),调节仪器,使浓度较大的参比溶液的透光度为零,而浓度较小的参比溶液的透光度为100%,然后测定较大的参比溶液的吸光度。
示差吸光光度法可以提高光度法的精确性,从而实现用吸光光度法对物质中某一含量较高或较低组分的测定。在示差吸光光度法的测量中,要求一个实际具有较高吸收的参比溶液的表现刻度读数为A=0或T=100%,故所用的仪器必须具有出光狭缝可以调节,光度计灵敏度可以控制或光源强度可以改变等性能。
双波长吸光度法
由于传统的单波长吸光光度测定法要求试液本身透明,不能有混浊,因而当试液在测定过程中慢慢产生混浊时就无法正确测定。单波长测定法对于吸收峰相互重叠的组分或背景很深的试样,也难以得到正确的结果。此外,试样池和参比池之间不匹配,试液与参比液组成不一致均会给传统的单波长吸光光度法带来较大的误差。如果采用双波长技术,就可以从分析波长的信号中减去来自参比波长的信号,从而消除上述影响,提高方法的灵敏度和选择性,简化分析手续,扩大吸光光度法的应用范围。
双波长吸光光度法是将光源发射出来的光线,分别经过两个可以调节的单色器,得到两束具有不同波长(λ1、λ2)的单色光,利用斩光器使这两束光交替照射到同一吸收池,然后测量并记录它们之间吸光度的差值△A。右使交替照射的两束单色光λ1、λ2强度都等于I0,则:
―1g(I1/I0)=
―1g(I1/I0)=
A 为光散射或背景吸收,若λ1和λ2相距不远时,A 可视为相等,则
―1g(I2/I1)-
上式说明,试样溶液在波长λ1和λ2处吸收的差值,与溶液中待测物质的浓度呈正比关系,这就是应用双波长吸光光度法进行测定的依据。
双波长测定法对混合组分分别定时时,一般是测定两个波长处的吸光度差。因此方法本身不能提高测定灵敏度。但是,用双波长法进行单组分测定时,如果选择显色剂的极大吸收波长和络合物的极大吸收波长作测定使用的波长时,由于形成络合物而降低的显色剂的吸收值直接加合在所形成的络合物的吸收上,使得络合物的表现摩尔吸收系数显著增加,这样使测定的灵敏度有所提高。
吸数吸光光度法
在普通吸光光度法中,如果吸光度很小,就不能得到精度很好的信号,如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上,测定就会受干扰,导数吸光光度法有可能克服这些困难。其原理是吸光度和摩尔吸收系数为波长的函数,所以朗伯-比尔定律可以用下式表示:
将上式对波长进行n次微分,得到吸光度对波长进行微分的微分值与吸收物质的浓度之间符合朗伯-比尔定律,因此它可以用于吸收物质的定量分析。
获得微分光谱的方法可分为光学微分法和电学微分法两类,后者已在多种类型的微机控制分光光度计中得到应用,它通常可以获得一、二、三、四阶导数光谱。
导数光谱的测量有多种方法:
(1)如果基线是平坦的,可以测量峰、谷之间的距离,这是最常